猪细小病毒病实验室诊断技术

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1、畜牧与饲料科学AnimalHusbandryandFeedScience2010，3l(8)：161—162猪细小病毒病实验室诊断技术孙运华(安徽省砀山县畜牧兽医水产局，安徽砀山235300)摘要：猪细小病毒可引起猪的繁殖障碍性疾病，其特征为感染母猪，特别是初产母猪，产出死胎、畸形胎、木乃伊胎、流产及病弱仔猪。给养猪业带来的经济损失巨大。主要对猪细小病毒病的实验室诊断技术进行了介绍，以期为有效防控该病提供参考。关键词：猪细小病毒：实验室诊断中图分类号：$858．285．3文献标识码：A文章顺序编号：1672—5190(2010)08-0161-021病料的采集和处理

2、毒的核心直径为14～17nm。取初产母猪的流产胎儿、死胎、木乃伊胎及弱仔的脑、3．2间接Dot—ELISA间接Dot—ELLISA见血清学诊断肾、睾丸、肺、肝、肠系膜淋巴结或母猪的胎盘和阴道分泌物4．2。等，病料按(1：5)～(1：10)比例，加入含青霉素(1000IU／4血清学诊断mL)、链霉素(1000mL)、卡那霉素(1000IU／mL)的4．1间接免疫荧光法0．5％水解乳蛋白溶液，研磨制成无菌乳剂．冰箱过夜，30004．1．1材料准备：①病毒抗原的制备：将PPV细胞培养液冻r／min离心10min，取上清液置一20℃保存备用。融4次，3000r／min离心3

3、0rain，取出细胞碎片，冻干法浓缩2病原的分离l2倍。血凝效价(HA)达1：1024，加双抗(400txg／mL)，细胞培养：按细胞培养液的1：10比例，将上述病料乳剂置一20℃保存备用。@PPV高免血清的制备：选用4月龄的的上清液接种于幼龄生长旺盛而又未形成单层的原代仔猪健康仔猪，经血检，HI效价在1：20以下，首免用PPV浓缩病肾细胞，37℃吸附90min，中途轻摇数次，倾去接种液，加入毒，口服和滴鼻剂量分别为20mL和10mL；第2次免疫，肌维持液(为0．05％水解乳蛋白M199溶液，内含2％犊牛血肉注射20mLPPV浓缩病毒；三免在后海穴注射5mLPPV清

4、，l％的1mmol／L丙酮酸钠，青霉素100IU／mL，链霉素100浓缩病毒；四免在耳静脉注射10mLPPV浓缩病毒。在末次m咖L，制霉菌素50IU／mL)，37℃静止培养，每天观察1次，免疫后1周采血．HI效价达1：1024，由颈静脉采血，分离血连续培养7～10d，盲传3代，同时设立对照组，观察细胞有无清，过滤除菌、分装，一20℃条件下保存备用。③兔抗猪IgG细胞病变(CPE)及血凝素出现，如病料有猪细小病毒(PPV)荧光抗体(商品化试剂)。④阳性对照：已知的PPV感染细胞时，在培养16～36h时，可观察到细胞核内出现包涵体，5～培养盖玻片，加PPV高免血清(1：

5、40)感作后，经洗涤，再加10d可见特征性CPE．开始细胞中出现弥漫性颗粒，继而细兔抗猪IgG染色及观察。⑤阴性对照：无PPV感染细胞培养胞变圆、丛集、固缩，崩解的细胞外形不整，最后脱离瓶壁。出盖玻片，加PPV高免血清(1：40)感作后，经洗涤，再加兔抗现CPE的培养液再用已知的特异性血清进行血清学试验。猪IgG染色、观察。⑥标本自发荧光对照片：空白细胞培养3病毒鉴定盖玻片。封裱后镜检。⑦荧光抗体对照：空白细胞培养盖玻3．1电镜检查将被检验品用磷钨酸染色液进行负性染片，再加兔抗猪IgG染色、观察。⑧病料的采集及冰冻切片色l～2min后，在电镜下进行检查，可见到病毒直

6、径为18～的制备：采取死胎和胎儿的肝、肺、肾组织制成冰冻切片，丙20llm，呈球形、椭圆形或六角形病毒粒子，病毒无囊膜，病酮固定，供观察用。4．1．2操作程序：将细胞盖玻片或4m的组织冰冻切片，收稿日期：2010—07—27用冷丙酮固定10rain，每个样品取2张片，分别滴加PPV高作者简介：孙运华(1964一)，男，高级兽医师，主要从事畜牧兽医技术推广工作。免血清(1：40)，置37℃恒湿、恒温箱中，感作30min后，缓冲牛子50g，炒葶苈子50g，炙枇杷叶50g，用法：水煎，加鸡治措施，使疫情迅速地得到控制。蛋清为引，10头仔猪为1剂，一次灌服，2次，d，连用3

7、d。通③猪群发生该病后，必须早诊断、早治疗。及时采取综过采取以上综合性防治措施，只有症状较严重的1O头仔猪合性的防治措施．才能使疫情很快得到控制。用药时。必须死亡，其余132头仔猪全部恢复健康。考虑到混合感染，要用2种病的特效药物对混合感染进行7体会控制。否则，会使疫情加重，死亡率增高，造成较大的经济损①根据对发病情况、临床症状、病理变化以及实验室检失。验与防治效果的综合分析，确诊该猪群发生的疫病为猪瘟④该养猪场发生猪瘟与猪肺疫混合感染，主要是由于与猪肺疫混合感染。从周围乡(镇)购进仔猪，饲养环境的突然改变，再加上该②猪瘟的临床症状及病理变化不够典型，只凭眼观判