ppar-γ激动剂环格列酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用探究

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1、PPAR-γ激动剂环格列酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用探究[摘要]目的探讨应用过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)激动剂环格列酮减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及其量效关系。方法70只健康sD大鼠建立心肌缺血再灌注模型后，随机分成假手术组(S组)、缺血再灌注组(I／R组)、环格列酮组1(cigl组)、环格列酮组2(cig2组)、环格列酮组3(cig3组)，每组14只。各组中又随机分为两个亚组。亚组l(6只)在缺血30min、再灌注120min后，以Evans6blue、NBT双重染色法测定心肌梗死面积；亚组2(8只)以生物

2、信号分析系统监测记录缺血1、30min，再灌注后1、30、60、90、120min各时间点的左室舒张末压(LVEDP)、左室内压(LVSP)及左室内压发展最大速率(±dp／dt)等血流动力学指标。实验结束时取心肌组织，光镜下观察心肌组织损伤情况，免疫组化法检测心肌组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达，酶联免疫吸附法(ELISA)测定心肌组织细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量，比色法测定心肌组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果与S组比较，I／R组大鼠心肌梗死面积增大，心肌MPO活性升高、中性粒细胞(P

3、MN)浸润严重，心肌细胞因子TNF-α、IL-6含量明显增多，心肌组织高表达ICAM-1(均P0.05)。见表1。2．2心肌组织MPO活性的测定I／R、cig1、cig2、cig3组MPO活性均较s组明显增加(JP0.5)。见表1。2．3　心肌组织形态学观察光镜下可见，s组心肌结构正常，细胞界限清晰，无明显水肿及炎性细胞浸润；I／R组心肌水肿严重，细胞界限不清，心肌细胞出现颗粒变性、空泡变性，胞浆疏松透明，炎性细胞浸润，血管充血，有红细胞渗出，心肌纤维排列不规则，结构紊乱；cig各组心肌轻度水肿，细胞界限清楚，炎性细胞散在浸润，心肌纤维排列及结构较

4、清楚。2．4　心肌梗死面积测定各组AAR／LV数据比较差异无统计学意义，说明各组缺血危险程度具有可比性，各组缺血面积比例基本一致。与s组比较，I／R组、cig各组的NEC／AAR比值明显升高(P0.05)。见表3。2．6　环格列酮对模型大鼠心功能的影响I／R组以及cig各组，结扎LAD引起心肌缺血后，LVSP、+dp／df、-dp／dt均明显下降，恢复灌注后上述指标进一步降低，再反弹到一较高值，然后又逐渐下降，到再灌注2h，上述指标仍存在下降趋势。与I／R组比较，cig1、cig2、cig3组再灌注90、120minLVSP明显升高(P0.05)。

5、见表4。63　讨论6MIRI的主要表现为心肌炎性反应，心肌细胞凋亡、坏死，心功能下降以及心律失常等，其机制相当复杂，是多种因素交互作用的结果。一般认为氧自由基、钙超载及中性粒细胞(PMN)浸润起着决定作用，且这些作用与细胞因子密切相关。以PMN浸润为主的炎症反应是造成MIRI的重要因素之一。炎症反应在心肌缺血阶段即被激活，再灌注则明显加剧了心肌的炎症反应。MPO是PMN的标志酶，其活性高低可以反映组织中PMN的浸润程度。本研究发现心肌IR时MPO活性明显升高，缺血心肌组织HE切片可见大量PMN浸润，存在明显的炎症损害。用PPAR-γ激动剂环格列酮干

6、预后，心肌MPO活性明显下降，PMN浸润程度减轻，提示环格列酮可通过抑制心肌内PMN浸润、减轻炎症反应来拮抗MIRI。ICAM-1在MIRI中起着重要作用，本研究表明IR后心肌ICAM=-1表达明显增高。而ICAM-1的高表达可刺激PMN与内皮细胞黏附，介导其对心肌细胞的浸润，引起并加剧心肌细胞的损伤，导致细胞死亡。Niessen等研究认为急性心肌梗死(AMI)心肌细胞中ICAM-1高表达，若抑制其表达，可减小梗死面积。本实验通过预先使用不同剂量的PPAR-T激动剂环格列酮对心肌IR进行干预，发现心肌ICAM-1表达明显降低，并可减小心肌梗死面积，

7、改善心脏舒缩功能。提示PPAR-T激动剂环格列酮可通过降低ICAM-1的表达起到心肌保护作用。许多实验研究证实，细胞因子尤其是TNF-α、IL-6作为重要的炎性介质在MIRI的病理生理过程中起着重要的作用。TNF-α是炎症级联的始发因子，可激活PMN，释放弹性蛋白酶和氧自由基等，并使炎症信号产生级联放大作用，直接损伤内皮细胞，使毛细血管通透性增高。。IL-6为白细胞和内皮细胞产生的重要炎性介质之一，处于炎症调控的枢纽位置。IL-6大量产生可诱导PMN进入缺血区，刺激黏附分子CDllb／CD18、ICAM-1的表达，介导PMN与心肌细胞结合，致使缺血

8、心肌损伤加重。本实验结果表明，与假手术组比较，缺血再灌注组心肌TNF-κ、IL-6含量明显升高(P<0.01)，提示TNF