wst 569-2017 疟原虫检测 血涂片镜检法

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1、ICS11.020C62WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T569—2017疟原虫检测血涂片镜检法Microscopicexaminationofbloodfilmsformalariaparasites2017-08-01发布2018-02-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布WS/T569—2017前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准起草单位：海南省疾病预防控制中心、江苏省寄生虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、云南省寄生虫病防治所、海南省农垦总局医院。本标准主要起草人：王善青、高琪、

2、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李雨春、刘莹、欧阳范献。IWS/T569—2017疟原虫检测血涂片镜检法1范围本标准规定了血涂片镜检法检测疟原虫的技术规范。本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原虫的显微镜检测。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1疟原虫Plasmodiumspp疟原虫是一类单细胞、寄生性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。寄生于人体的疟原虫主要有恶性疟原虫（Plasmodiumfalciparum）、间日疟原虫（Plasmodiumvivax）、三日疟原虫（Plasmodiummalariae）和

3、卵形疟原虫（Plasmodiumovale）等。2.2血涂片bloodfilms将血液涂制于载玻片上制成的涂片。供显微镜疟原虫检查用的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片两种。3仪器和器材3.1生物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×目镜）。3.2计数器。3.3载玻片（无划痕无油污的洁净载玻片）。3.4推片。3.5血片染色架。3.6血片干燥架。3.7玻片盒。3.8染色盘和染色缸。4试剂和材料1WS/T569—20174.1吉氏染色原液。4.2pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。4.3甲醇（分析纯）。4.4香柏油或专用浸油（折射率≥1.5）。4.5二甲苯

4、（分析纯）。4.675%酒精。4.7一次性采血针。4.8一次性手套。5检测步骤5.1血涂片的制作5.1.1采血部位及取血方法经75%乙醇消毒采血部位，待干后，用一次性采血针在耳垂或指端扎刺取血，婴儿可从拇趾或足跟扎刺取血。取1张已消毒推片，用拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片左下角刮取血液4μL～5μL用于制作厚血膜，再用该端中部刮取血液1μL～1.5μL用于制作薄血膜。5.1.2厚血膜制作取1张载玻片，将推片左下角的血滴涂于载玻片的中央偏左，由里向外划圈涂成直径0.8cm～1.0cm的圆形厚血膜,厚度以1个油镜视野内可见到5个～10个白细胞为宜。

5、5.1.3薄血膜制作用干棉球抹净推片左下角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使2张玻片保持25°～35°，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜。每张载玻片上1个厚血膜和1个薄血膜（参见附录A）。5.1.4编号血膜制好后水平放置，充分干燥后，用铅笔在玻片一侧毛玻璃上或在薄血膜上编号。5.2固定与溶血5.2.1薄血膜固定将薄血膜一端朝下呈45°，用棉签蘸取甲醇溶液，均匀轻抹于薄血膜表面，避免碰触厚血膜。5.2.2厚血膜溶血在干燥的厚血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟，待血膜呈浅灰色，倾去溶

6、血液。厚血膜制作后1d内染色无需溶血，超过1d的应溶血。5.3吉氏染色2WS/T569—20175.3.1吉氏染液的配制（参见附录B）吉氏染液包括吉氏染液原液和吉氏染液工作液。吉氏染液原液由5g吉氏粉加250mL甘油充分研磨后加入250mL甲醇配制。吉氏染液原液在避光条件下可长期保存。常用的吉氏染液工作液包括2%，3%和10%浓度三种，分别由吉氏染液原液和pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）按比例配制。吉氏染液工作液只能使用时新鲜配制。5.3.2单张血涂片染色（参见附录C）单张血涂片吉氏染色常用于临床疟疾患者的显微镜疟原虫检测。采用3%吉氏染液的常规染

7、色方法血涂片染色质量较好，可长期保存，染色时间约30min。采用10%吉氏染液的快速染色方法染色时间较短，8min～10min，但血涂片不适合长期保存。5.3.3成批血涂片染色（参见附录C）成批血涂片吉氏染色常用于人群流行病学调查中的显微镜疟原虫检测，常采用2%吉氏染液进行批量血涂片染色。5.4镜检5.4.1显微镜检查在染色后的血膜上加1滴香柏油或专用浸油，用100×油浸物镜、5×或10×目镜的光学显微镜检查。染色质量较好的血膜，红细胞呈淡红色，嗜酸性粒细胞颗粒呈鲜红色，嗜中性粒细胞核呈紫蓝色，淋巴细胞及疟原虫胞浆呈蓝色或淡蓝色，疟原虫核呈红色。除

8、环状体外，其他各期均可查见疟色素。疟原虫检测以厚血膜为主，虫种鉴别以薄血膜为主。看片路线顺序为薄血膜从舌尖部分开始，厚血膜