一起沙门菌爆发菌株鉴定及分子溯源探究

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1、一起沙门菌爆发菌株鉴定及分子溯源探究摘要：[目的]1起沙门菌爆发的菌株鉴定和分子溯源研究。[方法]收集2007年上海市黄浦区1起食源性沙门菌爆发病例的菌株，使用3种不同产地沙门菌分型血清进行菌株比对鉴定，测试菌株耐药性并对部分菌株进行多位点基因序列分型(MIST)。通过PluseNetChina非伤寒沙门菌数据库聚类分析上海市与重庆市爆发菌株的脉冲凝胶电泳(PFGE)图谱。[结果]发生在上海市黄浦区某工地爆发的1起食源性菌株，经血清学和MIST鉴定为汤卜逊沙门菌ST26型；菌株对6种抗生素(四环素、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、氯霉素、

2、萘啶酸、磺胺异恶唑)的耐药率均为100％。2007年重庆市报告多起食源性爆发案例中的C群沙门菌，经鉴定亦为汤卜逊沙门菌ST26型，与上海市的菌株间存在高度遗传同源性。[结论]兰州生物制品研究所和泰国S&A的沙门菌分型血清的H因子“c”和“k”间存在交叉凝集。2007年上海市黄浦区发生的食源性爆发病例可能为输入性汤卜逊沙门菌ST26型的多重耐药克隆株引起。关键词：C群沙门菌；鉴别诊断；交叉凝集；分子分型；爆发；多重耐药中图分类号：R516.3　文献标志码：A10上海市黄浦区疾病预防控制中心作为上海市4个监测点之一，于2007年加入全球沙门

3、菌监测网络(GSS)，现更名为全球食源性感染性疾病监测网(GFN)。实验室按照方案要求配置泰国产沙门菌分型血清对监测点医院定期送检的沙门菌腹泻病例菌株进行血清学复核。2007年10月，黄浦区中心医院连续报告5例以上疑为同一血清型的沙门菌腹泻病例，实验室初步鉴定为猪霍乱沙门菌，高度怀疑为聚集性病例，黄浦区疾病预防控制中心现场人员随即对病例进行流行病学调查。爆发菌株经我们使用泰国产沙门菌分型血清和丹麦SSI分型血清对菌株作分型比对、耐药分析和脉冲凝胶电泳(PFGE)等表型与分子型的综合分析后，最终确定引发此次食源性爆发的病原菌是汤卜逊沙门菌

4、。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　实验菌株　2007年上海市GSS监测的18株汤卜逊沙门菌(包括黄浦区中心医院分离的8株汤卜逊沙门菌爆发菌株和1株分离自市售猪肚的汤卜逊沙门菌)；大肠埃希菌ATCC25922为药敏试验质控菌株；布伦登卢普沙门菌H9812作为PFGE的分子量标准菌株；国内参考株丙型副伤寒沙门菌(CNCC50017-156)、猪霍乱沙门菌(CNCC50018-5)、猪霍乱孔成道夫变种沙门菌(CNCC50732)均来自上海市疾病预防控制中心菌种保藏室。101.1.2　培养基　亚硒酸盐煌绿增菌液(SBG)、罗伯特增菌液(R

5、VS)、木糖赖氨酸胆酸盐琼脂平板(XLD)、CHROMagar(tm)沙门菌显色琼脂平板(CAS)、水解酪蛋白琼脂平版(M-H)、H相诱导软琼脂平板来自上海科玛嘉科技有限公司；肠道双支糖综合鉴别管和其他辅助生化鉴定试剂由本中心供应室配置。以上增菌液和平板均避光10℃以下保存，在有效期内使用。1.1.3　试剂和仪器　血清有沙门菌分型诊断血清50种(兰州生物制品研究所)、沙门菌分型诊断血清79种(S&A，Ltd，泰国)、沙门菌分型血清118种(SSI，丹麦)；抗生素纸片包括四环素(TET)、头孢噻呋(EFT)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)、

6、氨苄西林(AMP)、复方磺胺甲嗯唑(SXT)、环丙沙星(CIP)、氯霉素(C)、氧氟沙星(OFX)、萘啶酸(NA)、头孢吡肟(FEP)、头孢噻肟(CTX)、头孢他啶(CAZ)、庆大霉素(CN)、链霉素(S)、磺胺异恶唑(s3)、甲氧苄氨嘧啶(W)(Oxoid，英国)16种；另有药敏分配器，VitekAM-60自动生化鉴定仪(生物梅里埃，法国)和菌液比浊仪(西门子，德国)；限制性内切酶XbaI(TaKaRa，日本)；SeaKemGold琼脂糖(CambraexBioRockland，美国)；脉冲凝胶电泳仪CHEFmappersystem和

7、凝胶成像系统GELDoc2000(Bio-Rad，美国)。血清和抗生素纸片均在有效期内使用。1.2　方法101.2.1　GSS监测　爆发病例调查按照《上海市沙门菌病监测方案2007年》中的定义和流行病学调查程序进行。1.2.2　菌株鉴定　8株爆发菌株由临床实验室使用兰州生物所的沙门菌分型血清作初步鉴定后，送辖区疾病预防控制中心实验室使用泰国S&A沙门菌分型血清复核鉴定，结果存疑者由市疾病预防控制中心实验室用丹麦SSI沙门菌分型血清确认。玻片凝集属于直接抗原抗体反应的定性试验，根据抗原抗体产生凝集颗粒的程度进行分级。+：菌体抗原凝集颗粒细

8、，背景浑浊不清；++：菌体抗原凝集颗粒较粗实，背景浑浊；+++：反应过程快，菌体抗原凝集颗粒细而均匀，背景较清；#：反应过程快，菌体抗原凝集颗粒粗实，背景清亮。1.2.3　抗生素敏感性试验　参照美国临床实验