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1、电喷雾质谱在非共价蛋白复合物研究中的应用1.前言质谱作为一种分析方法，长期以来一直用于小分子化合物的结构分析。直到80年代末电喷雾电离质谱（electrosprayionizationmassspectrometry,ESI-MS）和基体辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrixassistedlaserdesorptionionizationtimeofflightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS）两种“软电离（softionization）”质谱的出现，才将质谱的分析范围
2、扩大到生物大分子的结构分析。在生物界，生物分子的非共价特殊作用是分子识别的基础。因此，非共价复合物的检验在生物学上是一个重要的研究课题。虽然MALDI-TOF的较高灵敏度和Mr表征范围对于测定生物大分子物质优于ESI质谱，但是它在检测非共价复合物的应用上却受到供试品制备条件的限制[1]刘益华，徐俊福.基质辅助激光解吸飞行时间质谱在生物大分子中的应用.中国生化药物杂志.2004，25(3)：192-193。而ESI-MS对蛋白质复合物的研究在样品用量少、快速的情况下可得到可靠的数据和较多的信息。由于其具
3、有灵敏度高、快速和质量精确度高的优点，复合物的化学计量比能够很容易地推导出。通过改变源的锥孔（cone）电压、改变溶液的pH值和进样毛细管温度，可以比较不同化合物与蛋白质的亲合力的大小[2]ParmanikBN,BartnerPL,MirzaUA,etal.Electrosprayionizationmassspectrometryforthestudyofnon-covalentcomplexes:anemergingtechnology[J].JMassSpectrom,1998,33(10):9
4、11-920。对非共价键复合物进行部分酶解或完全酶解，还可以确定小分子与蛋白质的结合位点[3]MillarAL,NicholasAC,JacksonNAC,etal.Rapidanalysisofepitope-paratopeinteractionsbetweenHIV-1anda17-amino-acidneutralizingmicroantibodybyelectrosprayionizationmassspectrometry[J].EurJBiochem,1998,258(1):164-1
5、69.。可见，ESI-MS可广泛用于研究蛋白质非共价键复合物。到目前为止，用ESI-MS观察到的不同的非共价键复合物包括蛋白质-蛋白质［4］OgorzaleklooRR,GoodlettDR,SmithRD,etal.ObservationofanoncovalentribonucleaseS-proteinS-peptidecomplexbyelectrosprayionizationmassspectrometry[J],JAMChemSoc,1993,115(10):4391-4392，蛋白质-
6、配体［5］RobinsonCV,ChungEW,KragelendBB,etal.Probingthenatureofnoncovalentinteractionbymassspectrometry.Astudyofprotein-CoAligandbindingandassembly[J].JAmChemSoc,1996,118(36):8646-8653，蛋白质-寡核苷酸［6］Light-WahlKJ,SpringerDL,WingerBE,etal.Observationofasmallolig
7、onucleotideduplexbyelectrosprayionizationmassspectrometry[J].JAmChemSoc,1993,115(2):803-804.和蛋白质-双链DNA［7］ChengXH,MorinPE,HarmsAC,etal.Massspectrometrycharacterizationofsequence-specificcomplexesofDNAandtranscriptionfactorPU.1DNAbindingdomain[J].Analbioc
8、hem,1996,239(1):35-40.及蛋白质-金属离子等［8］HuP,LooJA.Gas-phasecoordinationpropertiesofZn2+,Cu2+,Ni2+,andCo2+withhistidine-containingpeptides[J].JAMChemSoc,1995,117(45):11314-11319.。1.电喷雾质谱（ESI-MS）的基本原理及特点其原理是[9,10]岳贵花，许崇峰，卞利萍等.电喷雾质谱在非共价蛋
