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《ctmab-tx体系与dna作用的共振光散射光谱的研究及分析应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、CTMAB-TX体系与DNA作用的共振光散射光谱的研究及分析应用第21卷第3期湖南科技大学(自然科学版)20o6年9月JournalofHunanUniversi~ofScience&Technol~(NaturalScienceEdition)Vo1.21No.3Sept.20o6酸性红一CTMAB—TX体系与DNA作用的共振光散射光谱的研究及分析应用苏界殊,龙云飞,蔡舟,李韧韬,丁小波(湖南科技大学化学化工学院,湖南湘潭4l1201)摘要:研究了脱氧核糖核酸(DNA)与阴离子染料酸性红(FA)及阳离子表面活性剂溴化十六烷基三甲铵(cTMAB)和非离子型表面活性剂T
2、ritonX一100(TX)作用的共振光散射光谱的特征考察了各种影响因素,在优化条件下确立了共振光散射强度与鱼精DNA和小牛胸腺DNA以及变性后的鱼精DNA和小牛胸腺DNA浓度之间的关系,相应的线性范围分别为(J,026—7.00mg/L;0.025-7,00mg/L;0.032—6.00mg/L;0.031—8.00mg/L,相关系数为0.9991;O,9996;0998l;0,9996,捡出限为7.0g/L;6.0g/L;11.0g/L;12.5L,基于共振光散射的增强,建立了一种测定DNA的新方法.图4,表3,参7.关键词:酸性红,脱氧核糖核酸,共振光散射光谱中图分类号
3、:0657.31文献标识码:A文章编号:l672—9102(2006)03—0093—04核酸也称多聚核苷酸,是构成生命的重要化学物质,也是生物遗传信息的载体.核酸探针作为研究核的有力工具,在现代分子生物学,生物医学,药物筛选以及食品分析中有着广泛的应用.共振光散射(RLS)法以其灵敏度高,选择性好已在生物大分子如蛋白质和DNA的分析中得到应用【1I2】.RLS法测定DNA常用的试剂为阳离子主体小分子『3I4],本研究发现,在阳离子表面活性剂溴化十六烷基三甲基铵(CTMAB)和非离子表面活性剂曲通X一]00(TX)存在时,DNA与阴离子主体小分子酸性红(FA)可发生结合反应,
4、并导致RLS强度增强,且RLS强度增加值与DNA的浓度呈良好的线性关系,以此建立了一种DNA测定的新方法.本方法具有灵敏度高,线性范围宽,检出限小的特点,用于DNA的测定,结果令人满意.1实验部分1.1仪器和试剂LS50B荧光分光光度计(美国PE公司);pHS一3C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂);鱼精DNA(fishspem1DNA(fsDNA),上海伯奥生物科技有限公司),小牛胸腺DNA(calfth)~usDNA(etDNA),华美生物工程公司):溶于适量的水配制成DNA含量为1()0.0m的贮备溶液,并在0—4r℃下保存;酸性红溶液(4.0X10mol/L),CTMAB
5、溶液(4.0×10m0I/L);TritonX一100溶液(2.0X10之玑);缓冲溶液:含0.01mol几的三羟甲基氨基甲烷(rris),以0.1moVL的盐酸调节配成;水为二次蒸馏水.热变性DNA的制备:在20mL干净的刻度磨口试管中加入20m的DNA操作溶液后,将刻度磨口试管置于沸水浴(96.C)中,15min后取出并立即放人冰水浴中以防止复性【5】.1.2实验方法22—25下,在20mL的刻度比色管中,依次加人2.00mIFA溶液,2.(】(】mL的CTMAB溶液,2.(】(】mL的2.00mLTX溶液和Fris—HCI缓冲溶液(3.00mL),混合后准确加人一定体积
6、的浓度为20.0mg几的DNA溶液,用水稀释至20.[)(】mI.混合均匀后,放置15rain,然收稿日期:2oo5—12—20作者简介:苏界殊(1967一),男,湖南湘潭人,副教授,硕士.主要从事光分析化学研究93后,用l×lcm的荧光比色皿,在荧光分光光度计上以Aex=Aem方式进行同步扫描,激发和发射狭缝均为8Snm,测得RLS光谱.最大共振光散射峰Amax=390nm,在波长390nm处测定DNA加人前后溶液的RLS的强度差,△,=,一,0,式中,,0,,分别为DNA加人前,后体系的RLS强度.2结果与讨论2.1光谱特征在最佳条件下,DNA,FA,CTMAB和TX溶液
7、单独存在时,在300—500nm范围内RLS信号十分微弱,二元,三元体系:FA+DNA,CTMAB+DNA,FA+CTMAB+TX,FA+TX+DNA,FA+CTMAB+DNA的RLS光谱见图1.可知,除CTMAB+DNA和FA+CTMAB+DNA体系可产生一定强度的RLS信号外,其余体系的RLS信号均较弱;表明CTMAB可在DNA表面产生一定的聚集作用与文献【6】结论一致.而在同等条件下,四元体系的RLS的强度远大于二元,三元体系(见图l和图2),表明FA与CTMAB,TX,DNA四者形成了更大的聚集
