dna对ru_bpy_2_dppx_2_sds体系共振光散射的猝灭作用及其应用

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1、第27卷第7期应用化学Vol.27No.72010年7月CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRYJuly20102+DNA对Ru(bpy)(dppx)-SDS体系共振光2散射的猝灭作用及其应用a*ab黄剑平梅平何治柯ab(长江大学化学与环境工程学院荆州434023;武汉大学化学与分子科学学院武汉)2+摘要研究了Ru(bpy)2(dppx)-SDS-DNA(bpy=2，2′-联吡啶，dppx=7，8-二甲基-吡啶并［3，2-a:2′，3′-c］吩嗪)体系的共振光散射光谱。结果表

2、明，在阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)预胶束聚集体存在下，2+Ru(bpy)2(dppx)-SDS体系具有很强的共振光散射，DNA的加入使其共振散射光猝灭。探讨了反应机理。2+基于DNA对Ru(bpy)2(dppx)-SDS体系共振光散射的猝灭作用，建立了共振光散射法测定DNA的新方法。在最佳实验条件下，体系在393nm处的共振光散射猝灭程度与DNA的浓度呈线性关系，线性范围为0.01～1.2mg/L，检出限为1.5μg/L。2+关键词Ru(bpy)2(dppx)，SDS，DNA，共振光散射

3、，猝灭中图分类号:O657.3文献标识码:A文章编号:1000-0518(2010)07-0849-06DOI:10.3724/SP.J.1095.2010.90604钌(Ⅱ)多吡啶配合物由于具有优良的光物理、光化学性质，近年来，这类配合物在有关核酸的分子［1－3］生物学和医学上的应用日益引起人们的兴趣，但主要是针对它们的荧光特性。共振光散射(resonancelightscattering，简称RLS)技术是一项新的光谱分析技术，已广泛应用于生物大分子、药物、［4～6］食品等生命科学相关领域的研究

4、中。用共振光散射法测定DNA的研究大都是基于小分子在DNA［7－10］2+分子表面聚集而导致共振光散射增强。本文研究了钌(Ⅱ)多吡啶配合物Ru(bpy)2(dppx)(bpy=2，2′-联吡啶，dppx=7，8-二甲基-吡啶并［3，2-a:2′，3′-c］吩嗪)与DNA相互作用的共振光散射光2+谱。结果表明，在阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)预胶束聚集体存在下，Ru(bpy)2(dppx)-2+SDS体系具有很强的共振光散射，DNA的加入使其共振散射光猝灭。基于DNA对Ru(bpy)2(dp

5、px)-SDS体系的共振光散射的猝灭作用，建立了共振光散射法测定DNA的新方法。1实验部分1.1仪器和试剂LS-55型荧光分光光度计(PerkinElmer公司);TU-1901型紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);pHS-3C型酸度计(上海雷磁仪器厂)。ctDNA溶液:将小牛胸腺DNA(华美生物工程公司产品)溶解于适量蒸馏水中配制而成，保存在0～4℃冰箱中，紫外测定A260/A280>1.8，其准确浓度由紫外光谱中260nm处的吸光度确定(1OD对应50mg/L)，操作液质量浓度

6、为10mg/L。2+Ru(bpy)2(dppx)溶液:将一定量的Ru(bpy)2(dppx)(BF4)2·2H2O(武汉大学分子光谱实验室合［11－12］成并表征)直接用蒸馏水溶解定容，配制成0.1mmol/L的储备液。Britton-Robison缓冲溶液:0.04mol/LH3PO4、H3BO3和HAc与0.2mol/LNaOH按一定比例混合，配成不同pH值的缓冲溶液。实验用水为二次蒸馏水，其它试剂均为分析纯。实际样品是从大肠杆菌中提取的质粒DNA(武汉大学生命科学学院提供)。2009-09-0

7、8收稿，2009-12-20修回湖北省自然科学基金资助项目(2005ABA308)通讯联系人:黄剑平，男，硕士，副教授;E-mail:jianping1018@163.com;研究方向:分子光谱分析850应用化学第27卷1.2实验方法在10mL比色管中加入1.00mLB-R缓冲溶液(pH=9.5)和0.50mL浓度为0.1mmol/L的2+Ru(bpy)2(dppx)溶液，旋涡混合后加入1.00mL浓度为2.5mmol/L的SDS，再旋涡混合，然后加入适量的DNA溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度，混合均

8、匀后放置15min，在荧光分光光度计上于λex=λem处进行同步扫描获得RLS光谱，在393nm处测定RLS强度。2结果与讨论2+2.1Ru(bpy)2(dppx)-SDS-DNA体系的光谱性质2+按实验方法测得Ru(bpy)2(dppx)-SDS-DNA体系的共振光散射光谱如图1所示。由图1可知，2+Ru(bpy)2(dppx)、DNA以及SDS本身在实验条件下的RLS均十分微弱(图1谱线a、b、c)，SDS和2+DNA的混合溶液以及Ru(bpy)2(dppx)和D