第2讲__微生物的培养与应用

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1、第2讲__微生物的培养与应用[考纲导学]　1.微生物的分离和培养　2.培养基对微生物的选择作用知识梳理

2、夯实高考双基回扣教材一、微生物的实验室培养1．培养基(1)定义：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。(2)成分：一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。(3)分类：按照物理性质可以分为液体培养基和固体培养基。2．无菌技术(1)含义：培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。(2)关键：防止外来杂菌的污染。3．无菌技术的方法、类型和对象(连线)【答案】　(①②⑥)—b—(ⅠⅡ)　(③④⑤)—a—(ⅢⅣ

3、)4．大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基过程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。(2)纯化大肠杆菌：①上图A可表示用平板划线法接种获得的平板，菌体的分离是通过9连续划线操作实现的。②上图B可表示用稀释涂布平板法接种获得的平板，菌体的分散是通过一系列的梯度稀释操作实现的。③菌种的保存方法：a．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。b．对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．筛选菌株(1)寻找目的菌株的原则：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。(2)实验室筛选尿素分解菌的方法：使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进

4、行培养。(3)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。2．微生物的计数常用的方法有显微计数法和稀释涂布平板法。3．实验流程(1)土壤取样：富含有机质的土壤表层土。(2)样品的稀释：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300、适于计数的平板。(3)微生物的培养与观察：根据菌落的特征区分微生物。(4)细菌的计数：统计菌落的数目，根据公式“每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M[C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数]”进行计算。4．分解尿素的细菌的鉴

5、定(1)方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养分解尿素的细菌。(2)原理：　　　　分解尿素的细菌9　　　　　　↓CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3　　　　　　　　　　　↓　　　　　　酚红指示剂→变红色三、分解纤维素的微生物的分离1．纤维素酶(1)组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。(2)作用纤维素纤维二糖葡萄糖2．纤维素分解菌的筛选(1)原理①筛选方法：刚果红染色法。　　　　　　　纤维素分解菌　　　　　　　　　↓→红色复合物红色消失，出现透明圈②培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。(2)实验流程土壤取样：富含纤

6、维素的环境↓选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度↓梯度稀释：制备系列稀释液↓涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上↓挑选产生透明圈的菌落9网络记忆重点突破

7、领悟高考方向重点1　微生物的分离与培养[考点精讲]1．消毒与灭菌技术的比较条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌2.两种微生物纯

8、化培养技术的比较方法平板划线法稀释涂布平板法注意事项(1)接种环的灼烧①(1)稀释操作时：每支试管及其中的99第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物②之后每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者(2)灼烧接种环之后，要冷却后再进行取种，以免温度太高杀死菌种(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连(4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1cm～2cm处(2)涂布平板时①涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后

9、将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精目的在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体——菌落培养平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染[命题视角]视角　微生物培养的无菌操作技术及纯化培养技术1．(2016·全国丙卷)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回