白术多糖对d-半乳糖致衰大鼠神经细胞抗氧化作用研究

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1、白术多糖对D-半乳糖致衰大鼠神经细胞抗氧化作用研究l2月第26白术多糖对D.半乳糖致衰大鼠神经细胞抗氧化作用研究马庆华张鹏霞郭红艳魏晓东欧芹(佳木斯大学基础医学院生物化学教研室,黑龙江佳木斯154007)(摘要)目的研究白术多糖对D一半乳糖致衰大鼠大脑皮质神经细胞抗氧化作用和DNA损伤的影响.方法以D-半乳糖大鼠侧腹部注射.制备衰老大鼠模型,同时连续灌服白术多糖45d,分别检测大鼠大脑皮质神经细胞超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;大脑皮质神经细胞丙二醛(MDA)的古量;

2、采用单细胞凝胶电泳法检测神经细胞DNA损伤程度.结果衰老模型大鼠较白术多糖给药组大鼠大脑皮质神经细胞SOD,GSH-Px活性显着提高(P<O.05;P《O.O1),MDA古量显着下降,DNA损伤明显降低(P<O.O1).结论白术多糖可以提高致衰大鼠神经细胞抗氧化物酵的活性,降低自由基代j物的古量,减少DNA损伤.具有一定的扰衰老作用.(美■饲】白术多糖;神经细胞;抗氧化作用;DNA损伤【中圈分类号】融艄.5【文献标识码】A(文章■号)1005-9202(7.006)1246.$8-03脑组织产

3、生氧自由基的机会较多能力较强.但其清除氧自由基及修复氧自由基损伤的能力却较弱,有实验表明大鼠大脑皮质抗氧化能力较弱.容易遭受损伤".2】.白术为菊科植物白术(AtraotylodesmacrocephalaKoidz)的根茎.主产浙江.近些年研究显示,白术具有很好的提高免疫力,抗氧化等多种作用j.但对白术中有效成分研究还较少.尤其是白术多糖的研究.本实验观察以白术多糖对D一半乳糖致衰老大鼠大脑皮质神经细胞抗氧化作用和DNA损伤的影响.1材料与方法1.1动物选用Wister大鼠,共3O只,雌雄各半,2—3月

4、龄.体重180～230g.分笼饲养.随机分组.动物由佳木斯大学动物实验中心提供.1.2方法1.2.1药物白术购于佳木斯大学中医药研究所,产地浙江.白术多糖从白术中提取获得.取白术生药粉末,加6倍量70%乙醇回流2次,每次2h,过滤.药渣加8倍量水煎煮3次,每次1.5h,合并水煎液,浓缩至相当于生药0.5g/IIll,静置,离心.上清液加入乙醇调至70%静置.抽滤,将沉淀用蒸馏水溶解,离心,上清液加乙醇调至70%静置.抽滤,沉淀用无水乙醇反复洗涤,60℃真空干燥,即得乳白色总多糖.1.2.2试剂与仪器SOD

5、,MDA,GSH-Px测试试剂盒(南京建成生物工程研究所)D?半乳糖,胰蛋白酶,DMEM培养基,Tris,Triton?100,二甲基亚砜.肌氨酸钠,正常熔点及低熔点琼脂糖等,其他试剂为国产分析纯.恒温水浴箱(郑州长城科工贸有限公司).电子分析天平(沈阳龙腾电子有限公司).水平电泳槽和电泳仪(北京八一仪器厂).OlympusBX60荧光显微镜(日本).基金项目:黑龙江省教育厅科研项目(10541216)通讯作者:张精霞(1967-).女.教授,硕士生导师,主要从事抗衰老及抗.肿瘤药物研究.作者简介:马庆华

6、(1977.),女,在读硕士,从事抗衰老药物研究.1.2.3模型制备及给药方法将大鼠随机分为青年对照组,衰老模型组及给药组.分组饲养,自由进食(基础饲料)和水,熟悉环境2d.模型组及给药组每日上午侧腹部皮下48m~/kg剂量注D.半乳糖,青年组每日上午侧腹部皮下注生理盐水,剂量等于其他给药组D-半乳糖给药量.同时给药组用白术多糖液(浓度为0.056g/mL)以白术多糖0.28g/(kg-d)的剂量灌胃(31,模型组及青年组灌服等于其他中药给药量的温开水.每10d称一次体重,D一半乳糖量及灌胃量作相应调整.

7、连续灌服45d.第46天断头处死各组大鼠,取大脑皮质检测各项指标.1.2.4白术多糖含量的测定采用苯酚-浓硫酸法】.1.2.5测定指标取大脑皮质匀浆,采用黄嘌呤氧化酶法测定神经细胞SOD活性;采用化学比色法测定神经细胞GSH—Px活性;神经细胞MDA含量测定采用TBA化学比色法(操作详见说明书).神经细胞DNA损伤测定采用单细胞凝胶电泳法.1.2.6神经细胞悬液的制备取大鼠大脑皮层的部分组织,立即至于冰冷的Hanks液中冲洗2—3次,取出置于装有Hank8液的小烧杯中,用眼科小剪剪碎后加入1O倍体积的0.

8、125%的胰蛋白酶,于37℃下消化15min.加入10%小牛血清的冰DMEM培养基终止消化.用细口径吸管轻轻吹打成均匀一致的细胞悬液,经200目尼龙网过滤,所得滤液经1000r/min,5min离心.沉淀再用0.01mol/LPBS洗一次.并悬于其中.用0.4%的台盼兰排斥实验检查细胞成活率,本实验细胞存活率达9o%以上.1.2.7单细胞凝胶电泳(彗星法)…在6o℃下.将100正常熔点琼脂糖在无Ca2,Mg2的PBS液下浇注到