生物工程下游技术

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1、填空题1.超声波破碎细胞的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及细胞类型等因素有关。2.目前用于固液分离的膜过滤法主要有以下三种:微孔过滤(微滤)、超滤、反渗透。3.在生物工程下游技术领域，色谱和电泳是目前所知最好的两种分离蛋白的方法。4.无论是什么类型的液相或气相色谱,其色谱装置均应包括:流动相供给、进样、色谱柱、检测器等四大部分。5.在色谱过程中，有两种将目标产品从色谱柱上洗脱下来的方法：一种是维持流动相热力学参数不变的等梯度洗脱法，另一种叫梯度洗脱法。6.评价HPLC色谱填料性能的主要表征指标包括：（每空0.5分）保留值

2、，选择性,柱效率，填充柱的空喜和穿透性,分离度。7.请列举任意四种破碎细胞的方法：（每空0.5分）高压匀浆法，高速珠磨法，超声破碎化学渗透法。8.在HPLC领域内经常可以遇到的吸附等温线可以有以下5种（形状）:（每空0.5分）凹形，,凸形，,S形，H形，阶梯形。9.羟其磷灰石在原理上一般被认为是一种弱离子交换色谱。（本小题1分）10.请列举二种测量蛋白质含量的方法考马斯亮蓝法，克氏定氮法。（每空1分）。11.常见的无机色谱填料主要包括：硅胶、可控孔径玻璃、氧化铝、氧化钛、羟基磷灰石以及碳和石墨等基质。12.无机HPLC填料最常

3、见的是以多孔硅胶为基本材料的填料；含硼的Na2O-B2O3-SiO2系玻璃经过热处理引起相分离，生成可溶于酸的Na2O-B2O3相及不溶于酸的高硅相。将酸可溶相浸析出来后剩下的另一相就制成了可控孔径玻璃，可控孔径玻璃的主要化学成份就是二氧化硅。13.不同分子量的蛋白质在电场中的迁移速度与其所带的静电荷数成正比，与它本身的半径及溶液的粘度成反比。(每空1分)(11页)1.径向色谱填料主要有：离子交换树脂和亲和色谱填料两种。2.溶质保留置换理论的核心是：当一个溶质被吸附剂西湖时,在溶质份子和吸附剂接触的表面必然会释放出一定数目的溶

4、剂分子。(本小题3分)18．指出三种交联葡聚糖的微载体：Cytodex1微载体；Cytodex2微载体；Cytodex3微载体19．指出蛋白质复性的三种方法：稀释法，透析法，液相色谱法等20．固液分离的主要方式包括：离心法，过滤法，双水相萃取，泡沫分离法。21．膜的孔径一般为微米级，依据其孔径的不同（或称为截留分子量），可将膜分为微滤膜、超滤膜、纳滤膜和反渗透膜22色谱的保留值可以用保留时间也可以用保留体积来表示。23．色谱的峰宽可以用半峰宽、峰底宽、标准偏差表示。25．线性色谱的吸附等温线是直线，非线性色谱的吸附等温线的形状

5、常见的有：凸形、凹形、S形、H形、阶梯形。从吸附等温线的形状可以预见色谱曲线的形状，一般凸形的吸附等温线代表色谱图是拖尾的，凹形吸附等温线代表的色谱图是吐舌头形状、S形的色谱图是波浪形的。30．离子交换层析一般是通过梯度一般采用两种方法达到分离蛋白质的目的。一种是增加洗脱液的离子强度，一种是改变洗脱液的pH值。32．目前径向色谱柱使用的填料主要有离子交换树脂和亲和色谱两种;33．蛋白质含量和纯度测定方法。含量测定:克氏定氮法，TCA比浊度法、双缩脲法、福林-酚法和紫外线法，考马斯兰法（Bradford法）。纯度衡量:电泳法，层

6、析法，质谱法等。一般应采用二种以上方法，而且同一原理的方法不应该采用二次。34．细胞破碎法包括：机械力和非机械力破碎方法；机械方式又包括：液体剪切力和固体剪切力方法，液体剪切力包括：高压匀浆法和超声破碎法；固体剪切力包括：高速珠磨法和压榨法。35．高压匀浆法的主要困难包括：温控和堵塞问题26．高压匀浆法的破碎率决定于：匀浆阀的结构，操作压力，破碎次数。34．蛋白质的分子量测定：超离心法：光散射方法：凝胶过滤法：SDS-PAGE电泳法：(11页)一、简答1、细胞破碎的方法有哪些？机械破碎：通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破

7、碎。捣碎法、研磨法、匀浆法、超声法物理破碎：通过各种物理因素的作用，使组织、细胞的外层结构破坏，而使细胞破碎。温度差破碎法、压力差破碎法化学破碎：通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎。有机溶剂、表面活性剂、酸碱酶促破碎：通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎自溶法、外加酶制剂法2、比较凝聚和絮凝？凝聚：指在中性盐（铝、铁的盐类）作用下，由于双电层排斥电位的降低，而使胶体脱稳并使粒子相互聚集成１mm大小块状凝聚体的过程。絮凝：指使用高分子絮凝剂（天然的和合成的大分子量聚电解质）将

8、胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。其中絮凝剂主要起架桥作用。3、气液色谱中色谱柱中载体有哪些特点？1、不溶性；2、渗透性，即具有疏松的网状结构，容许大分子自由通过；3、高硬度及适当的颗粒形式，最好为均匀的珠状；4、最低的吸附力；5、较好的化学稳定性；6、抗微生物