阿奇霉素分散片微生物限度检查计数方法验证

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1、目录一、概述1二、目的1三、范围1四、验证组组成1五、测试环境条件要求1六、验证步骤2（一）细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证2（二）控制菌方法验证4七、再验证6八、评价6九、附表6-8-阿奇霉素分散片微生物限度检查计数方法验证一、概述微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌、霉菌、酵母菌及控制菌检查。根据《中华人民共和国药典》2005年版（二部）规定，应对细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法进行验证。二、目的确认所采用的方法适合于阿奇霉素分散片的微生物限度检查，即确认阿奇霉

2、素分散片在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性被充分消除到可以忽略不计。以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。三、范围适用于阿奇霉素分散片微生物限度检查方法的验证实施。四、验证组组成组长：成员：五、测试环境条件要求所有检查在环境洁净度10000级下的局部100级洁净度的水平单向流空气区域内隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及环境已定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证，并符合要求。-8-六、验证步骤本品为大环内酯

3、类抗菌药，对革兰氏阳性需氧菌及革兰氏阴性需氧菌均具有抑菌性，拟采用离心集菌+薄膜过滤法进行细菌计数检查，采用常规法进行霉菌和酵母菌计数。（一）细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证1.菌种枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003大肠埃希菌CMCC（F）44102白色念珠菌CMCC（B）98001黑曲霉CMCC（F）980032.培养基、试剂、试液营养肉汤培养基或营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨溶液3.仪器设备高压蒸汽灭菌器、净化间、净化工件

4、台、恒温水浴锅、天平、恒温培养箱管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的10ml无菌毛细吸管4.样品来源为本公司一车间所生产,批号分别为:5.菌液制备5.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，于30~35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，于23~28℃培养18～24小时。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，于23~28℃培养5～7天。5.2取上述金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌培养物1ml加9ml的0.9%无菌

5、氯化钠溶液10倍递增稀释至10-5～10-7为50～100个/ml，做活菌计数备用。5.3取上述白色念珠菌霉菌液体培养物1ml加9ml的0.9%无菌氯化钠溶液10-8-递增倍稀释至10-5～10-7为50～100个/ml，做活菌计数备用。5.4取上述黑曲霉斜面培养物，加3～5ml的0.9%无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸取出菌液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的10ml无菌毛细吸管），取1ml加9ml的0.9%无菌氯化钠溶液（10-1），逐管10倍递增稀释至10-4～10-5约50～100个/ml，做活菌计数备用。6.供试

6、液制备取供试品10g,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨溶液至100ml,混匀，制成浓度为1：10的供试液。6.1上述供试液取10ml,500r/min离心5min,取上清液再以3000r/min离心20min,留底部集菌液约2ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨溶液补至10ml,混匀，作为细菌计数检查的供试液。6.2霉菌、酵母菌计数检查直接取用上述1：10的供试液。7.计数方法验证过程7.1试验组：7.1.1取灭菌的直径为90mm的平皿6个，各倾注温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基15ml-20ml，混匀，凝固，备用。分别取供

7、试液2ml，按《中国药典》2005年版二部附录XIJ中“薄膜过滤法”过滤，用600ml冲洗液冲洗，并在最后一次冲洗液中加入相应的试验菌1ml。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌分别制备2张滤膜。取下滤膜，菌面朝上贴于平皿上，倒置培养。7.1.2取灭菌的直径为90mm的平皿4个，各倾注不超过45℃的溶化的玫瑰红钠琼脂培养基15ml-20ml，混匀，凝固，备用。2个平皿各加1:10供试液1ml，白念菌悬液1ml。2个平皿各加1:10供试液1ml，黑曲霉菌悬液1ml。倒置培养。7.2菌液组每种菌悬液用两个平皿取1ml菌悬液，加入

8、平皿中，倾注不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基15ml-20ml，混匀，凝固，倒置培养。7.3供试品对照组取1:10供试品液1ml，按菌落计数方法测定细菌、霉菌及酵母菌的本底数（方法和试验组相同，只是不加试验菌）。-8-7.4稀释剂对照组用稀