植物组织培养的设备与使用方法

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1、植物组织培养的设备与使用方法植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。要达到无菌操作和无菌培养，就需要认为创造无菌的环境，使用无菌的器具，同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备，实验设备因工作的目的、具体的任务和所具有的条件而异。但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和用具。灭菌室培养基配置化学实验室洗涤室细胞学观察室接种室驯化移栽室苗圃地培养室图1组培室分区布局1.实验室基本组成a)无菌操作室在植物组织培养中，无菌操作室（cleanchamber）是进行植物材料的分离及培养体转移的一个重要场所。由于植物组织培养需长时

2、间的无菌操作，所以无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。微生物的培养生长时间短，而植物组织培养短的一个月，长的达几年。所以，防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。无菌操作室基本要求是：干净无菌、密闭、光线好。一般安装滑动门，使空气不致流动，以防外界菌及尘埃的侵入；墙壁光滑平整，地面平坦无逢，便于清洁工作；室内安装紫外灯，以便灭菌，还要有照明装置及灯座，以备临时增加设备之用；室内有超净工作台、移动式载物台（医用平板推车）、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具等。面积根据工作性质可大可小，小的无菌操作室一般一间5~7㎡即可。接种室内主要安放超净工作台，分单人使用和双人同时

3、连续作业使用两种。超净台中准备接种用的器具，如尖头小镊子、弯头小镊子、接种针、解剖刀、手术剪刀等，以及酒精灯、储存70%酒精浸泡的棉球的广口瓶等。如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种，还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜，以便观察、解剖和分离细小的外植体。小型离心机主要用于分离和收集液体培养中的细胞、单花粉及原生质体等，也可用来筛选处于不同发育阶段的胚状体。无菌室外最好设置预备室作为缓冲间，以防工作人员进出时带进杂菌。控温光照培养箱可以安放在缓冲间内。预备室与无菌室之间最好以玻璃相隔，便于观察和参观。在预备室可放置工作服、鞋、帽等，也需要装自来水和紫外灯。b)化学实验室组织培养

4、中植物植物材料是生长在人工配制的培养基上，这就需要在化学实验室预先配制好培养基。化学实验室一般由以下几个部分组成：（1）洗涤室主要用于培养容器、玻璃器皿、用具和培养材料的清洗。新购进的玻璃器皿一般先用1%盐酸除去可溶性无机物，再用中性洗涤剂；使用中的玻璃器皿可用洗涤剂清洗，自来水冲洗；对较难洗涤的器皿，如吸管等应用洗液进行洗涤。洗涤室需备有工作台面、上水管和下水管、水池、落水架、电源、干燥箱等。（2）药品室用于存放无机盐、维生素、氨基酸、糖类、琼脂、生长调节物质等各种化学药品。要求室内干燥、通风、避免光照。室内设有药品柜、冰箱等设备。各类化学试剂安要求分类存放，需要低温保存的药剂应置于冰箱保

5、存。有毒药品应按规定存放和管理。（3）称量室根据需要，配备各类天平。要求干燥、密闭、无直射光照。一般配备1/100普通天平（coarsebalance）和1/10000的电子天平（sensitivebalance），可能的话。加配1/1000和1/100000的天平，形成系列。除电源外，应设有防震固定的台座。（4）培养基配置室用于配制、分装培养基以及培养基的暂时存放。室内应配有各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管、移液器等器具；有平面实验台以及安放药品和器皿的各类药品柜、器械柜、物品存放架；有水浴锅、电饭锅、微波炉、过滤装置、酸度计、分注器以及贮藏母液的冰箱等。（5）灭菌室用于器皿、器械、封口

6、材料和培养基的消毒灭菌。要求墙壁耐湿、耐高温。室内需要备有高压蒸汽灭菌装置、细菌过滤装置、煤气灶和电炉等。玻璃器皿和小用具的消毒常采用干热灭菌法，150℃约保持1-3h。培养基、蒸馏水及一些用具，采用120℃高压蒸汽灭菌法。在没有条件的地方，可将上述工作合并在一个房间内完成，但设备的安装与排列要合理，房间要宽敞、明亮、通风。a)培养室培养室（cultureroom）是将接种到试管等的培养材料进行培养生长的场所。需配有固定式培养架、旋转式培养架、转床和摇床、控温控光设备，以满足器官（芽、茎、花药等）、愈伤组织、细胞和原生质体的固体和液体培养的需要。进行固体培养和试管苗大量繁殖时，培养材料通常摆

7、在培养架上，制作培养架应考虑使用方便、节能、充分利用空间以及安全可靠。培养架材料为金属、铝合金或木制品。隔板可用玻璃板、木板、纤维板、金属板等，最好使用玻璃板或铁丝网，既透光，上层培养物又不受热。为使用方便，通常设计为5-7层，最低一层离地面高约50cm，以上每层间隔30cm左右，培养架高约1.7-2.3m。一般在每层上方装置日光灯以供补充光照，培养架长度通常根据日光灯的长度设计。宽度可根据工作情况而定，一般