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1、to-Bac快速基因表达系统2006;32(2)蚕业科学CANYEKEXUE183利用细菌转座子构建适于家蚕的Bac-to-Bac快速基因表达系统吴小锋曹翠平鲁兴萌(浙江大学动物科学学院,杭州310029)摘要为了较好地解决家蚕杆状病毒基因表达系统(BmNPVexpressionsystem)在重组病毒构建和纯化过程中存在的重组率低,空斑分析技术繁琐,花费时间长等缺点,借鉴国外AcNPVBac—to—Bac快速基因表达系统工作原理,对家蚕BmNPV基因组进行了改造.通过同源重组的方法,将含有单拷贝数细菌F复制子,插入
2、有细菌转座子整合靶住点,编码LacZa肽的部分DNA片段和抗性选择标记基因的基因片段重组入家蚕BmNPV基因组,替换多角体蛋白基因,获得了家蚕BmNPV病毒穿梭载体BmBacmid;并利用供体质粒上的表达盆和细菌转座子以及细菌转座子的基因定位转移作用,在细菌体内实现外源目的基因向家蚕BmNPV基因组上的转移整合,快速完成重组BraN—PV病毒的构建.关键词家蚕;杆状病毒;细菌转座子;表达系统中图分类号$881.2;Q78文献标识码A文章编号0257—4799(2006)O2一O183一O7Constructionof
3、ARapidBmNPVinSilkworm,BombBac-to-BacSystemforApplicationmoriL.byUsingmor/LUSng_BacterialTransposonWUXiao—FengCAOCui--PingLUXing-Meng(CollegeofAnimalSciences,ZhejiangUniversity,Hangzhou310029,Ch/na)AbstractInorderl0overcomesomedisadvantages0fBmNPVexpressionsyste
4、m.suchasIowrecombina—tionfrequency,laboriousplaqueassaysandlong-timetaking,anovelandrapidexpressionsystembasedontheprinciple0fAcNPVBac—to—Bacsystemwasconstructedinthisstudy.Thissystemcangeneraterecombi—nantbaculovirusgenomeinbacteriumthroughgenetranspositionbyt
5、ransposon,andcanbeappliedinsilk—worm.inthisconstruction.alargeDNAfragmentcontainingtheIOW—copy—numbermini-Freplicon,akanamy—cinresistancemarker,andasegmentofDNAencodingthelacZapeptidewasinsertedintothelocusofpoly'hedringeneofBmNPVgenomeThusobtainedrecombinantBm
6、NPVgenomewasnamedasBmBacmid.ToproducetherecombinantBmNPV,theforeigngenewasfirstsubclonedintothedonorvectorwhichequippedwithbacteriaItransposon.andsubsequentlytransposedtoBmBacmid.Bycolorselection,lherecombinanlBmBacmid.i.e.,therecombinantbaculovirusgenomewasrap
7、idlyisolated,andthereaftertherecombinantbaculoviruswaseasilygeneratedthroughfransfectionintoculturedcells.KeywordsBombyxmori;Baoulovirus:BacteriaItransposon;Expressionsystem昆虫杆状病毒基因表达系统是表达重组蛋白的有力工具.我们应用家蚕杆状病毒表达系统已收稿日期:2006—02一l4资助项目:国家重点基础研究发展计划"973"项目(编号~05CB1
8、21003);农业部科技项目(编号20∞一C5);浙江省科技厅项目(编号瑚640l5).作者简介:吴小锋(1966一),男,浙江,副教授.Tel:057l一86971658,E—mail:wuxiaofeng@zju.edu.c"在家蚕体内成功表达生产了人FGF,人VEGF等,并对该表达系统在扩大宿主域,提高表达水平等方面进行了改进_6'.传统
