生物药物分析思考题

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1、思考题*生物药物的特点?答:1都为生物大分子,2.组成,结构复杂,具有严格的空间构象,以维持其生理功能3近与人体的正常生理物质4安全毒性小5更高的生化机制合理性,和特定的治疗有效性特点:1相对分子质量需测定性2生物活性检查3安全性检查4效价测定5生化发结构测定*生物制品的质量检定包括哪些方面?答:1理化测定2.安全检定3效力检定理化检定:外观,真空度和溶解时间,蛋白质,防腐剂,纯度,其他安全检定:一般安全性检查杀菌,灭活,脱毒外源性污染过敏性检查效力检定:动物保护力活疫苗抗毒素和类毒素血清学实验*生物药物常用的定量方法有哪些?答:1酶法2电泳法3理化测定4

2、生物检定法*什么是电泳?如何对其分类,分别有哪些?答:电泳是指带电粒子在电场力的作用下与自身所带相反的电荷方向移动分类:按支持物可分为:纸电泳,醋酸纤维素薄膜电泳,淀粉凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳按凝胶形状可分为:水平平板电泳,圆盘柱状电泳,垂直平板电泳*影响电泳迁移率的因素包括?答:1,带电粒子的性质,电子带静电荷越多,越接近球形,电泳速度快2,电场强度,越强速度越快3溶液的ph值,对于蛋白质来说,当ph接近等电点,速度越快,4离子强度,离子强度越小,速度越快5电渗作用,阻碍*血清蛋白常用什么电泳技术分离?核酸常用什么电泳技术分离?答:醋酸

3、纤维素薄膜电泳和琼脂糖电泳*为什么聚丙烯酰胺凝胶电泳是应用最广泛的凝胶电泳技术?答:1page解离基因量很少,电渗流少,吸附量低,容易制备,2机械性较好,孔隙可以调节凝胶比重实现可调,具有可拉性分析筛效应3,一定范围对热稳定,无色透明,容易观察,4Acr较纯,可精制,污染小5page在280nm没有吸收利于pro的检测。*SDS-PAGE电泳用于测定?其中SDS的作用是什么?答:sds主要是用来测定蛋白质的分子量,其中sds作用有两个:1,消除不同蛋白表面表面电荷效应,2引起蛋白构象改变,消除蛋白质的结构效应*核酸在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率取决于哪三个因素

4、?答:凝胶浓度,核酸的大小,核酸的形状*DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时,有什么效应与什么效应?答:分子筛效应和电荷效应*聚丙烯酰胺凝胶电泳包括连续系统和不连续电泳,其定义和区别分别是什么?答:1.连续系统:缓冲液的离子成分、PH、凝胶浓度、电位梯度都相同,带电颗粒电泳时仅具有电荷效应、分子筛效应。2.不连续系统:缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度、电位梯度不连续,带电颗粒电泳时具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。区别:不连续系统能使稀样品在电泳过程中浓缩成层,从而提高分辨率*什么是分子筛效应?答:指的是:一种含有不同分子大小的样品溶液,流经凝胶中,个疯子做垂直

5、向下运动,大分子不容易进入凝胶微孔,小分子在凝胶间扩散,并且可以进入凝胶微孔,所以小的分子保留事件比较长,后流出,大的分子保留时间比较短,所以先流出。(在电泳过程中,分子筛作用小于电泳的驱动力,所以小分子跑得比较前先流出,大分子后流出)什么是等电点?什么是等电聚焦?答:在某一ph的溶液中,当两性例子的正负电荷值相等,该ph值为等电点。等电聚焦:在电泳槽中放入载体的两性点解质形成一个由阳极到阴极增加的ph梯度,当蛋白质放进此体系时,不同蛋白质即移动到或者聚焦于与其等电点相当的ph值的位置上。*在生物大分子的高效液相色谱分离分析中,哪些是常用的分离模式?各分离

6、模式的原理和应用对象是什么?答:常用的分离模式为:吸附色谱,分配色谱,离子交换色谱,体积排阻色谱,亲和色谱吸附色谱:机理:依靠分离物质和流动相分子竞争固定相的活性位置,从而使溶质洗脱下来对象:几何异构体,磷脂,甾体,脂溶性维生素,前列腺素分配色谱:机理:利用被分离物质在两相的分配系数不同而使组分分离对象:氨基酸,多肽分析,蛋白质分离,碱基核酸和核酸酶,糖类离子交换色谱:机理:组分离子与树脂上的可交换例子基团进行可逆交换,根据组分离子对树脂的亲和不同而达到分离。对象:例子或者可离解的化合物,如氨基酸,多肽核酸,核苷和碱基体积排阻色谱:机理:组分通过体积排阻色

7、谱中的固定相(多孔隙凝胶),产生分子筛效应来实现分离。对象:高聚物,蛋白质亲和色谱:机理:样品中各种物质与固定相载体配基之间亲和作用的差别而实现分离对象:酶,酶抑制剂,抗体,抗原,受体*简述亲和色谱的分离机理。答:机理:1样品中各种物质与固定相载体配基之间亲和作用的差别而实现分离,2,过程是待测物质和配机间的亲和复合物形成及其解离的过程,对于非转移性的吸附的杂质,可用缓冲液洗去。*什么是生物检定法?答:生物检定法:利用药物对生物(整体和离体)的作用,来测定其生物活性的一种定量方法。应用范围:药物效价的测定,药物毒性成分和有害物质的限度检查,新药的研发氨基酸

8、、蛋白质*氨基酸最常用的鉴别方法是什么?答:氨基酸的茚三酮检测法,

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