联合应用卡那霉素和速尿的豚鼠耳蜗毒性实验观察

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1、联合应用卡那霉素和速尿的豚鼠耳蜗毒性实验观察贤芬　杨仕明　胡吟燕　孙建和　郭维　韩东一【摘要】目的　探讨卡那霉素和速尿联合用药对豚鼠耳蜗的毒性作用。方法　实验组25只豚鼠先行肌肉注射卡那霉素500mg/kg，2小时后静脉注射速尿50mg/kg，对照组4只豚鼠。于药物注射后7天行听觉脑干诱发电位（ABR）仪检测试验组和对照组豚鼠耳蜗听功能，对阈值大于95dBSPL豚鼠行耳蜗铺片免疫荧光染色和常规切片观察，并对耳蜗进行扫描电镜观察。结果　实验组25只豚鼠中有13只豚鼠ABR测试阈值高于95dBSPL，将这些致聋豚鼠作为观察对象，发现毛细胞和神经纤维明显受损，以耳蜗第

2、一、二回损伤明显。结论　卡那霉素和速尿联合用药可导致豚鼠毛细胞和神经纤维严重受损，是建立耳聋模型的一种快速而有效的方法。【关键词】卡那霉素速尿听觉脑干诱发电位耳蜗组织病理学免疫荧光【Abstract】Objective　Toinvestigatetheototoxicityofco-administrationofkanamycin（KM）idetoguineapigs.Methods　GuineapigsreceivedanintramuscularinjectionofKM（500mg/kg）folloide（50mg/kg）.Auditorybrainst

3、emresponses（ABRs）onitortheanimals'hearingatthe7thdayafterthedrugadministration.Immunohistochemicalandhistopathologicalchangesicroscopyandscanningelectronmicroscopy.Results　SubsequentABRmonitoringshoanent.HistopathologicalexaminationshoinistrationofKAandfurosemideeffectivelyproducesap

4、rofoundhearinglossinguineapigsanditisaneffectivedeafeningmethodforacuteanimalexperiments.　　【Keyycin（KM）;　Furosemide;　Auditorybrainstemresponses（ABRs）;;　Cochlearhistopathology　　联合应用肌肉注射卡那霉素（kanamycin，KM）和利尿酸（ethacrynicacid，EA）进行动物耳聋造模具有单次给药诱导耳聋而不必刺激耳蜗或者圆窗的优点［1］。卡那霉素是氨基糖甙类抗生素，其内耳毒性临床和试

5、验研究已有不少报道；速尿是袢利尿剂，速尿耳毒性的试验研究表明［2］其能使血管纹边缘细胞产生病变，我们的前期实验采用听性脑干反应（ABR）等项检测证明，在ＫＭ和ＥＡ联合用药后三天，豚鼠听功能即严重受损［３］。本研究利用冰冻切片、耳蜗铺片琥珀酸脱氢酶(SDH)染色法、免疫荧光染色和扫描电镜观察技术，从内耳病理形态学方面评价卡那霉素和速尿联合应用对豚鼠耳蜗的毒性作用。　　1　材料和方法　　1.1　动物分组　　选用耳廓反应灵敏的健康成年白色红目豚鼠29只，雌雄不限，体重250～300g（由解放军总医院实验动物中心提供），随机分成两组,实验组25只,空白对照组4只。　　1

6、.2　动物用药　　实验组豚鼠先给予硫酸卡那霉素500mg/kg大腿内侧肌肉注射一次，2小时后给予速尿静脉注射：先用速眠新0.01ml/kg大腿内侧肌肉注射麻醉动物，手术暴露一侧颈静脉，按50mg/kg于30秒钟内将速尿注入［３］。　　　　硫酸卡那霉素：25万单位/ml，天津药业焦作有限公司生产，批号：06051531；速尿：10mg/ml，天津金耀氨基酸有限公司生产，批号：0606191。速眠新：1.5ml，解放军军需大学畜牧研究所提供，主要成分为氟哌啶醇、新眠灵、氯胺酮。　　1.3　听性脑干反应（ABR）阈值测试　　两组豚鼠均于用药后7天应用美国智听公司Int

7、elligentHearingSystemSmartEP2.22系统,在隔声屏蔽室内行双侧ABR阈值测试。刺激声用短纯音（toneburst），带通滤波宽度为300～3000Hz，叠加次数1024次，扫描时间10ms。电极设置为：颅顶为记录电极，耳为参考电极，地极置入鼻尖。短纯音2kHz，4kHz，8kHz，16kHz作为刺激音。　　1.4　标本制备　　断头取出颞骨，打开听泡，在耳蜗顶部钻一小孔，同时打开椭圆窗和圆窗；再用吸管从蜗尖小孔向耳蜗内灌入4%多聚甲醛固定液，至液体从两窗流出,然后将颞骨浸入固定液浸泡固定。取实验组ABR阈值大于95dBSPL的8只豚鼠耳

8、蜗和对照组3只耳蜗做常规