电磁脉冲辐照对小鼠血-睾屏障早期影响及tgfβ3表达意义

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1、电磁脉冲辐照对小鼠血?睾屏障早期影响及TGFβ3表达意义彭页，程义成,梅盛林,张远强张金山,侯武刚【摘要】目的探讨电磁脉冲（EMP）辐射后小鼠血?睾屏障的结构和通透性早期损伤及TGFβ3在其中的作用。方法常规HE染色和硝酸镧示踪电镜技术观察400kV/m电磁脉冲辐射后2～48h内小鼠睾丸血?睾屏障结构和通透性的动态改变；免疫组织化学染色和图像分析技术检测TGFβ3在不同时间的表达规律。结果400kV/m电磁脉冲辐射后48h内生精细胞变性、凋亡与坏死逐渐增多，支持细胞及其紧密连接发生形态变化，血?睾屏障结构损伤，各时间点TGFβ3表达强度（灰度值）持续性

2、显著增强（均P<0.05），提示其通透性明显升高，于辐照后2h即见发生。上述血?睾屏障的结构和通透性变化的时间和程度具有一致性。结论EMP辐射后早期小鼠血?睾屏障的结构和通透性迅速发生损伤，TGFβ3可能在其损伤中发挥重要作用。【关键词】电磁脉冲；辐射；硝酸镧；睾丸；TGF?β3Abstract:ObjectiveTostudytheearlyinflunceofblood?testisbarrierinducedbyelectromagicpulseirradiationinmouseandthemechanismofactionofTGFβ3

3、expressioninthisprocess.MethodsRoutineHEstainingandlanthanumtracingelectronmicroscopyelectromagicpulseirradiationonmouseblood?testisbarriemunohistochemicalmethodandimageanalysiselectromagicpulseirradiation,spermatogeniccellspresenteddegeneration,apoptosisandnecrosis,theshapeands

4、tructureofSertoli’scellandtightjunctioneabilityincreasedainlyexpressedinthecytoplasmofLeydig’scellsandinterstitialtissue,anditsexpressionpersistentlyincreasedagesofmouseblood?testisbarrierrapidlyoccurredafterelectromagicpulseirradiation,andTGFβ3mayplayanimportantroleinthisdamagi

5、ngprocess.Keyagicpulseradiation；lanthanum；testis；blood?testisbarrier;TGFβ3电磁脉冲（Electromagicpulse，EMP）是一种高能、超宽频谱电磁波，在未来民用和军事领域均会有广泛的运用，其生物学效应已受到各国学者广泛的关注［1］。睾丸是EMP高度敏感器官之一［2］。既往研究大多侧重于睾丸生精上皮和间质细胞，且多仅为中晚期损伤效应，迄今罕有对血?睾屏障影响的报道。本研究采用常规苏木精?伊红染色（Hematoxylin?Eosinstaining,HE）、硝酸镧示踪电镜，观察

6、400kV/m电磁脉冲辐射后2～48h内小鼠睾丸血?睾屏障结构和通透性的变化，并结合TGFβ3（transforminggro全身照射，前沿3ns，脉宽340ns，脉冲间隔25s，共计200个电磁脉冲，对照组小鼠也置于同样的环境中假照射。1.3实验方法及步骤[*2]1.3.1HE染色与电镜观察辐射组与对照组小鼠分别于辐射后上述五个时间点各取3只，在戊巴比妥钠腹腔注射（40mg/Kg）麻醉下，取双侧睾丸，左侧睾丸固定于Bouin’s液24h，常规脱水石蜡包埋，连续切片（4μm），裱贴于三?氨丙基三乙氧硅烷（3?Minopropyltriethoxysil

7、ane,APES）处理过的载波片上，行常规HE染色；右侧睾丸迅速固定于镧醛固定液，随即切为1mm2大小继续固定2h，用含镧的0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液浸洗3次，每次10min，然后用不含镧的10g/L四氧化锇（OsO4）固定2h，经二甲砷酸钠缓冲液浸洗后常规电镜梯度丙酮脱水，Epon?812包埋，LKB?NoVa型超薄切片机切片，用JEM?2000EX型电镜观察［3］。1.3.2TGFβ3免疫组织化学ABC法［4］石蜡切片常规脱蜡后入3%甲醇?H2O2封闭内源性过氧化物酶30min；1%山羊血清室温孵育30min封闭背景IgG，倾去血清，加TGF

8、β3兔抗多克隆抗体（1∶100），4℃冰箱孵育过夜；生物素标记二抗（羊抗兔IgG,1∶300）