雷公藤双向固体发酵过程中的化学成分变化研究

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1、雷公藤双向固体发酵过程中的化学成分变化研究［摘要］目的:研究雷公藤双向固体发酵过程中化学成分的变化规律。方法:采用紫外分光光度法测定雷公藤双向发酵过程中总二萜和总生物碱含量;采用高效液相色谱法测定雷公藤双向发酵过程中雷公藤甲素和两个单体生物碱含量。结果:在发酵90d时，雷公藤总二萜发酵下降了46%而总生物碱含量仅下降约13%，雷公藤甲素含量降低了89.4%而wilforgine和wilforine含量降级幅度较小。结论:双向发酵过程中真菌对雷公藤生物碱含量影响较小，而对二萜类化合物含量影响较大。［关键词］双向固体发酵;

2、雷公藤;生物碱;二萜;雷公藤甲素StudyonChangesofChemicalConstituentsinTripterygiumwilfordiiduringProcessofFermenting［Abstract］ThecontentoftotalditerpenoidsandtotalalkaloidsweredeterminedbyUVspectrophotometryandtriptolideandtwomainalkaloidscontentswereassayedbyHPLCinordertostudy

3、onthechangesofchemicalconstituentsinTripterygiumwilfordiiduringtheprocessoffermenting.Theresultsshowedthataftermaterialsbeingfermentedfor90days，thecontentoftotalditerpeneandtotalalkaloidsdecreasedby46%and13%，respectively，atthesametime，triptolidecontentdecreasedb

4、y89.4%，whilethecontentsofwilforgineandwilforinedecreasedbylittle.ItwereconcludedthatfungihavelargeinfluenceonthecontentoftotalditerpeneinT.wilfordiiFandlessinfluenceontotalalkaloidduringbi-directionalfermentationinthispaper.［Keywords］Bi-directionalfermentation;T

5、ripterygiumwilfordii;alkaloid;diterpene;triptolide雷公藤TripterygiumwilfordiiHooK.为卫茅科植物，别名黄藤木、断肠草等。性味苦，有大毒，常以去两层皮的根木质部入药，具有免疫抑制、抗肿瘤、抗生育等多种药理活性。目前雷公藤及其制剂在临床上已应用于治疗类风湿性关节炎、成人各种肾炎、系统性红斑狼疮等多种自身免疫性疾病，是首选的中药免疫抑制剂，但其临床应用毒副作用大的问题一直未得到解决。国内外学者从多个方面探索了降低雷公藤的毒副作用的方法，但均不能从根本上

6、解决雷公藤的毒性问题［1］。本课题组在前期的研究中，采用“药用真菌新型固体发酵工程”(简称双向发酵)用药用真菌对雷公藤进行整体固体发酵，探索雷公藤的减毒持效(毒性降低但仍然保持免疫抑制作用)，已筛选出了有效发酵药用真菌菌种;建立了最佳发酵菌种工艺，得到·59·第16卷第10期2010年8月中国实验方剂学杂志ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulaeVol.16，No.10Aug.，2010了毒性降低并且仍然保持免疫抑制效果的灵雷菌质(G30)。测定了G3

7、0急性毒性并观察了对抗炎、免疫器官及细胞免疫的影响，并进一步研究了G30对佐剂性类风湿关节炎及阿霉素诱导的大鼠肾炎的作用，结果已有文章发表［2-4］。本文进一步采用多种检测手段从不同角度研究雷公藤双向发酵过程中化学成分的变化规律，旨在探讨双向发酵雷公藤的解毒持效机制，同时为确定灵雷菌质中主要药效/毒性物质基础及灵雷菌质新药材的质量控制提供实验依据。1材料BS124S电子天平(Sartorius);UV-2102紫外-可见分光光度计(Unico);Agilent1100液相色谱仪。中性氧化铝(100～200目);甲醇，乙

8、酸乙酯均为分析纯;分析用Merk甲醇和乙睛为色谱醇;生物碱wilforgine和wilforine对照品为本实验室自制;雷公藤甲素(111567-200502)购自中国药品生物制品鉴定所。6年生雷公藤生药材采自福建泰宁GAP种植基地，切片，60℃烘干粉碎。雷公藤生药材经高温灭菌2h后得灭菌药材;灭菌药材经药用真菌分别发酵0，10，