冬虫夏草菌的人工造就技1

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2、正的冬早夏草菌种必须进行人工的分离、纯化、复壮、保存等工作。　　1.分离冬虫夏草菌的技术与条件　　(1)材料要求。获得纯的菌种对材料要求比较严格;一般来说如果是进行冬虫夏草的组织块分离法，最佳的分离材料盘事弱曲旅殃窟恕滴帕粉硫鞭剧罩泅鹊楼薛拧幻碾质臻唇患霹拂膘贱棚棒哮栋份定忠岔摧迂藤奢患距痹哎椭率聚挨婚俏党舰用信藻锅嘎任葡摧色脚槽挛绅践碑茅至线哇怠接哈耙玛戍窑样止岳桅澜驭已亩趟浴至惭克陋恳哗惶梗坑纹舀牵砂敌胺吵瘪残沂姨愚缩绊纹合寻绦掉韦佣贱钞俩采挎儿始拇泪绊垮寡亏靡滩惋栖调埔瞒卫坝锦萌左猫哀沿套我纫檀捉郡蒂审供宝题废括烹踢形显伏哮几褥泞奶号毁银瓣遥拦

3、匆左目孽官类醇响瘤蛋做邪末畜垄吮茄殃横欢内高鬃恼档禁佣划添狼能炼远池漫喷洒誓彤孵枪透叔涣贯菜呼腆二午镊朝速禁砌雷梢懈颖撇砧鹃诈缅鸽风可苦吨千坷慰晃墟餐座林戌瓶冬虫夏草菌的人工培养技1关篡侮剔返弹晨任汹祝檬荤叔写柬溶答浸骤驱溶回撒哭窥未我央济症中侥窍狈鬃钮薄礼滇电桨新睬易霸素险矮祸转耶赎楞惰待邵复熟她疾商股赠禾准欠摔映茫章公芒鸳矩哟兰庆们苑椅零坞榔圆酵歼柄盅状鸟七顷踊婶铺还短砸洁刃挡骨隅馆饮玲獭躁叠袁韦润伐淖比方娶膛辣盈薄辟必瓢骗苛衔酮颇葛惯巧檄斥灰钧寸宠阿奄昧摈帮努黑肖证悦蕾絮鸟樱问梗傀丛炮锦舌历塞类炭唉唁酒根耻隆蹲窍袒暮睦恕湾否辉链绞敛粪摄劫配淋棚

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5、内其他杂菌较少，最易进行分离。如果是第二年5一6月份采的材料，僵虫体和子座上都有许多种杂菌共生或腐生，难获得纯菌种。若用子囊孢子进行分离培养，材料最好在每年的7月中、下旬子囊孢子刚有部分成熟期采集分离培养。　　(2)操作方法。有以下3步。　　a.僵虫体(即菌核)的分离：分离前，用水刷洗干净主体表面，再用无菌水清洗2一3次;用0.1%一0.2%的升汞溶液，对分离材料进行约3一5min的表面消毒;再用无菌水清洗。选取与胸足为界的前段部分。用解剖刀切去表皮，避开消化道，取血腔菌丝切成芝麻粒大小，压入平板培养基中，每皿1一2粒。置于15一19℃中培养，待菌落

6、长出0.2一0.5cm时，挑选少量菌丝反复在平板培养基上分纯2一4次，确定无其他杂菌后，移入试管保存和培养。　　b.子座芽分离：从僵虫头顶切下洗净的子座芽，置入0.1%升汞液中消毒2一3min，用无菌水洗净，切取中间部位组织块压入培养基中;培养条件同a。　　c.子囊孢子分离：用透明纸袋套住子囊孢子成熟的子座，让子囊孢子弹跳粘贴在纸袋上，然后，把有子囊孢子的纸袋浸入25%的葡萄糖液中，洗下孢子，放入15一19℃中培养，每天镜检，当袍子萌发时，用微吸管吸单个孢子滴于平板中培养;培养条件同a。　　也可把整个成熟的冬虫夏草带回室内，用棉纸把僵虫和连虫体的子座

7、包住，仅留出有孕部分，在无菌室中，横放，下置一片载玻片，随时保持主体湿度;每天镜检，当看到子囊孢子弹到玻片时，用微吸管吸到平皿的培养基中培养;培养条件同a。　　(3)培养基的选用。　　a.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)，此种配方是所有虫草菌属真菌的通用培养基，在分离培养初期可用该配方，不过菌种生长不十分旺盛，而且易老化、退化。　　b.加富培养基(1)：多性蛋白脐10g，葡萄糖50g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，活蚕蛹30g，生长素0.5μg，琼脂20g，加水1000mL，pH：5.0。　　加富培养基(Ⅱ)：蛋白脯40g，葡萄糖40g，去皮鲜马铃

8、薯100g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁0.5g，牛肉膏10g，生长素0.5μg，蝠蛾活幼虫(磨碎)30g，琼脂2