虎杖中游离羟基蒽醌成分的提取和分离

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<实验>虎杖中游离羟基蒽醌成分的提取和分离  虎杖为蓼科植物虎杖（PolygonumcuspidatumsiedetZucc）的根及根茎。别名阴阳莲，花斑竹。味苦、性微寒。能清热解毒、祛风利湿、利尿通淋、祛痰、止咳、通经等。主要用于湿热黄疸、风湿痹痛、淋浊带下、经闭、烫伤。虎杖中含有较多的羟基蒽醌类成分及二苯乙烯类成分。其中主要有大黄素、大黄、大黄素-6-甲醚、大黄素3-D-葡萄糖苷及β-谷甾醇、鞣质等。虎杖得主要药理作用有抗菌、抗病毒及镇咳平喘、常用来治疗急性炎症、烧烫伤、肝炎、气管炎等。一、虎杖中主要成分的结构与性质1．大黄素（Emodin）：橙黄色长针晶（丙酮中结晶为橙色，甲醇中结晶为黄色），mp256-257℃。几不溶于水，对于下列溶剂的溶介度分别为：四氯化碳0.01%，氯仿0.0718%，二硫化碳0.009%，乙醚0.14%，苯0.0415。易溶于乙醇，可溶于氨水，碳酸钠和氢氧化钠水溶液。2．大黄酚（Chrysophanol）:金黄色六角型片状结晶（丙酮中结晶）或针状结晶（乙醇中结晶）。mp196℃，能升华。易溶于乙醚、氯仿、苯、冰乙酸、乙醇,稍溶于甲醇，难溶于石油醚，不溶于水、碳酸氢钠和碳酸钠水溶液。可溶氢氧化钠水溶液及热碳酸钠水溶液。3．大黄素6-甲醚，（Emodinmonomethlether）:金黄色针晶，mp207℃，能升华。可溶于氢氧化钠水溶液，溶解度与大黄酚相似。 4．大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷（AnthraglycosibeA）：黄色针晶（稀甲醇中结晶）mp230-232℃。5．大黄素3-D-葡萄糖苷（AnthraglycosideB）:浅黄色针晶（稀乙醇中结晶含1分子水mp190-191℃。6．白藜芦醇（Resveratrol）：无色针状结晶，mp256-257℃，216℃升华，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。7．白藜芦醇葡萄糖苷（polydotinpeceid）：无色颗粒状结晶，双熔点分别为130-140℃225～226℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水，可溶于乙酸乙酯、可溶于碳酸钠和氢氧化钠水溶液中，稍溶于冷水，难溶于乙醚。8．β-谷甾醇9．鞣质：属缩合鞣质，可溶于醇及水，不溶于苯、乙醚、氯仿等。 另外，虎杖叶、茎中含少量羟基蒽醌类化合物、有机酸、槲皮苷、异槲皮苷、虎杖黄酮苷、扁蓄苷、金丝桃苷及芸苷、Vtio等。二、实验原理：羟基醌类化合物及二苯乙烯类成分，均可溶于乙醇中，故可用乙醇将它们取出来。羟基蒽醌类易溶于乙醚等弱极性溶剂，白藜芦醇苷在乙醚中溶解度很小，利用它们对乙醚的溶解性差异使羟基蒽醌类与白藜芦醇苷分离，再利用各羟基蒽醌类结构上的不同所表现酸性不同，用PH梯度萃取法分离它们。三、实验方法：（一）提取乙醇总提取物的制备：取虎杖粗粉200g，于1000ml圆底烧瓶中回流，第一次加500ml乙醇回流一小时，第二次加300ml乙醇回流30分钟，第三次加250ml乙醇回流30分钟，合并三次乙醇提取液，放置，如有沉淀可过滤一次，滤液减压回收乙醇至干，得膏状物。（二）分离1．亲脂性成分与亲水性成分的分离：将上述膏状物加水10ml，乙醚100ml充分振摇后放置，将乙醚液倾于500ml三角瓶中（水层不可倒出），再于烧瓶中加50ml乙醚振摇，放置，倾出乙醚液，同法操作六次，合并乙醚液即为亲脂性成分——总游离蒽醌，乙醚提取过的剩余物中含水溶性成分。2．游离蒽醌分离：（1）强酸性成分的分高：将上述含总游离蒽醌的乙醚液置100ml分液漏斗中，加5%碳酸氢钠水溶液40ml萃取（测5%碳酸氢钠PH值），放置使充分分层，若提取过程中乙醚挥发可补充，分出碱水溶液同法提取二次，合并碱水提取液，在搅拌下缓缓滴加6N盐酸调至pH=2，注意观察颜色变化，稍放置即可析出沉淀，抽滤，用水洗涤沉淀中性，将沉淀置蒸发皿上干燥，得强酸性成分。（2）中等酸性成分——大黄素的分离：碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液（测5%碳酸钠水溶液的pH值）萃取5～9次，每次40ml，直至萃取液较浅为止。合并碳酸钠提取液，小心加盐酸调pH3 ，放置，抽滤，水洗沉淀至中性，抽干，干燥称重。以甲醇一氯仿或苯一氯仿（1：1）重结晶，得大黄酚和大黄素6-甲醚混合物。注：大黄酚和大黄素6-甲醚二者相互分离比较困难，在本实验薄层条件下为同一斑点，可用层析用磷酸氢钙进行柱层析，以石油醚洗脱，下层黄色带洗脱后，以甲醇重结晶可得大黄酚，上层黄色带洗脱后以甲醇重结晶可得大黄素6-甲醚。（3）中性成分——甾醇类化合物分离：氢氧化钠萃取过的乙醚液，用水洗至中性，以无水硫酸钠脱水，回收乙醚得残留物，以甲醇热溶二次（10ml，5ml）过滤合并甲醇液，浓缩，放置结晶，滤取沉淀并用少量石油醚洗涤，再用甲醇重结晶，得β-谷甾醇，mp136～137℃，取少许结晶，做醋酐——浓硫酸反应，观察现象。（三）鉴定化学检识：分别取大黄素、大黄酚等少许，用乙醚溶解，做如下反应：A：碱液试验：取试液1ml，加20%NaOH数滴，观察颜色。B．醋酸镁反应：取试样1ml，加醋酸镁试剂数滴，观察现袋。2．薄层鉴定：吸附剂：硅胶—CMC展开剂：C6H6—EtoAc(3:2或97：9)。显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH喷雾。