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1、人参皂苷Rb1和Re对乌头碱所致心肌细胞损伤的保护作用论文董晞,赵世萍,刘岩,李平【摘要】目的观察人参皂苷Rb1和Re对乌头碱导致的心肌细胞损伤的影响。方法选用乳鼠心肌细胞,观察人参皂苷Rb1和Re分别与乌头碱配伍使用后,乳鼠心肌细胞上清心肌酶谱的改变,采用RT-PCR的方法,观察人参皂苷Rb1和Re与乌头碱配伍对心肌细胞钙离子通道基因Cav1.2mRNA的影响。结果人参皂苷Rb1和Re可以有效对抗由乌头碱导致的心肌酶谱改变。同时,可以对抗乌头碱所致的钙离子通道基因Cav1.2mRNA表达上调。结论人
2、参皂苷Rb1和Re与乌头碱配伍具有减毒增效的作用,这可能与人参皂苷减轻了乌头碱所致的心肌细胞损伤和改善钙离子通道异常表达有关。【关键词】人参皂苷Rb1；人参皂苷Re；乌头碱；心肌酶谱；钙离子通道Abstract：ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofginsenosideRb1andReoninjuryoftheneonateratcardiomyocyteinducedbyaconitinealkaloids.MethodsTheinfluenceof
3、aconitineandginsenosideRb1,Retogetherinneonateratcardiomyocyteyocyteinedbymyocardzymogram.TheexpressionofCa2+channelgeneCav1.2mRNAofneonateratcardiomyocyteaftertreatmentRNAabundanceinducedbyaconitine.ConclusionTheginsenosideRb1andReechanismmayberelation
4、yocytesandabundantexpressionofCav1.2mRNAinducedbyaconitine.Keyyocardzymogram；Ca2+channel为了探讨人参与乌头碱的相互配伍作用,了解人参各成分与乌头碱之间是否有配伍减毒的作用,.freelRNA表达的影响。1实验材料1.1动物出生后1～3d的EM高糖(GIBCO公司),胰蛋白酶(GIBCO公司),胎牛血清(北京市元亨圣玛生化制品有限公司),5-溴脱氧尿苷(Sigma公司),培养瓶(COSTOR公司),24孔培养板(NU
5、NC公司)。SABC免疫细胞化学试剂盒、MouseAnti-saconmericactin抗体、DAB染料(武汉博士德生物公司)。Trizol-100试剂盒(GIBICO,lnvitrogenCorporation生产),逆转录(RT)试剂盒、PCR试剂盒均为promega公司产品,购自北京华美转导科技有限公司。倒置显微镜(奥林帕斯公司,日本),恒温CO2培养箱(NAPCO,美国),全自动生化检测仪(日立7600),高速冷冻离心机(久保田3740,日本)，Bio-RAD电泳仪、ABIPCR仪、Alph
6、almeager凝胶成像系统(AlphaInotech公司).freelm3的组织碎块,加入0.1%胰蛋白酶消化,8min后沉淀心肌组织,弃去首次消化的细胞悬液。再次加入0.1%胰蛋白酶消化8min,吸取细胞悬液移入另一装有少量20%FCS/DMEM培养基的离心管中终止消化,1200r/min离心10min,弃上清液,加入完全培养液,悬起细胞。此步骤重复6～8次,直至组织块消失。合并所有细胞悬液,100目筛网过滤后,再次离心收集细胞。用含有20%胎牛血清的DMEM将细胞悬起,转入25cm2培养瓶中,置
7、于5%CO2、37℃培养箱中培养2h,以差速贴壁的方法去除非心肌细胞,加入含有5-溴脱氧尿苷(0.1mmol/L)的完全培养基稀释细胞悬液,平均分入若干培养瓶后继续培养,36h后换液。倒置显微镜观察细胞生长状况及细胞博动情况,待细胞长满后,用浓度为0.125%胰蛋白酶和0.02%EDTA-Na2的消化液进行消化传代,以试验所需密度传入24孔板中,继续培养24h左右,即可用于试验。2.2心肌细胞的鉴定将分离的心肌细胞接种于6孔细胞培养板,培养48h后用4%多聚甲醛固定,采用鼠抗α-saericactin
8、antibody及SABC免疫组化染色试剂盒对心肌细胞中特有的横纹肌肌动蛋白进行定位,对心肌细胞鉴定,同时确定心肌细胞纯度。2.3人参皂苷Rb1和Re对由乌头碱导致的心肌细胞损伤的保护作用将原代培养的心肌细胞按5×104cells/孔的密度传代至24孔板中,培养12h,更换成含有2%FCS的DMEM培养液。继续培养12h后,分为4组加药：不加药物空白细胞对照组空白组、0.3mmol/L乌头碱单独作用组、0.1mmol/L人参皂苷Rb1和0.3mmol/L
