微生物转化人参皂苷及人参皂苷ck对顺铂所致小鼠急性肾损伤保护研究

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1、分类号：R284.1R285.5单位代码：10193密级：公开学号：2012140硕士学位论文微生物转化人参皂苷及人参皂苷CK对顺铂所致小鼠急性肾损伤保护研究MicrobialtransformationofginsenosidesandprotectiveeffectofginsenosideCompandKagainstcisplatin-inducedacutekidneyinjuryinmice作者姓名：王国明学位类别：医学硕士专业名称：中药学研究方向：天然产物化学指导教师：李月茹教授所在学院：中药材学院2015年6月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导

2、师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业

3、大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要本研究选取四种微生物菌种分别为凝结芽孢杆菌、大肠杆菌、乳酸菌、酵母菌发酵生晒参，采用紫外分光光度计测定四种菌种转化后生晒参中

4、人参总皂苷含量。结果表明，常规方法提取测得的人参总皂苷含量为3.96±0.41%，发酵后的生晒参中人参总皂苷含量在3.24%～5.21%之间，凝结芽孢杆菌转化后人参总皂苷含量升高约31%，含量升高最明显。其次，本文通过高效液相（HPLC）法分析四种菌种发酵后生晒参和人参茎叶总皂苷中9种主要人参皂苷的含量变化，色谱条件为AgilentEclipseXDB-C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相乙腈：水按照程序进行梯度洗脱，检测波长203nm，流速1.0mL/min，进样体积为10μL。结果表明，发酵后的生晒参和人参茎叶总皂苷中主要人参皂苷含量呈现一定的变化，大肠杆菌、

5、乳酸菌、酵母菌发酵后各个单体皂苷含量变化不明显，但凝结芽孢杆菌发酵处理后人参皂苷Rb3和Rd含量显著降低，说明经过发酵处理后有稀有皂苷产生。通过TLC、HPLC初步确定有人参皂苷CK生成。HPLC检测的色谱条件为XDB-C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相乙腈：水=45:55，柱温30℃，检测波长为203nm，流速为1mL/min。本文以人参皂苷CK的含量为指标，在单因素实验的基础上，采用正交实验设计优化凝结芽孢杆菌转化人参茎叶总皂苷生成人参皂苷CK的条件，最佳工艺条件为：培养温度为35℃，接种量1%，转速为120r/min，发酵时间是36h。本文利用经典的硅胶柱

6、层析对发酵后的产物进行纯化，并利用高效液相色谱法HPLC、核磁共振法NMR鉴定检识，通过对比CK标准谱图，确定该化合物的结构为人参皂苷CK且纯度≥90%。文考察人参单体皂苷CK对肾脏疾病的药理活性。经腹腔注射顺铂（10mg/kg）建立急性肾损伤模型，实验小鼠分为正常组、模型组、人参皂苷CK低剂量组（20mg/kg）、人参皂苷CK高剂量组（40mg/kg），人参皂苷CK连续给药10d，每天测量小鼠体重及日常饮食饮水量，实验结束时眼眶取血测定血清中BUN、Scr含量，并取肾脏组织称重计算肾脏指数。同时测定肾脏组织中SOD、GSH、MDA活性。结果表明人参皂苷CK20、40mg/k

7、g给药组均可改善小鼠肾脏组织形态，抑制肾脏组织SOD和GSH活性下降，降低肾脏组织中MDA含量，同时降低血清中BUN、Scr水平。说明人参皂苷CK对顺铂所致小鼠急性肾损伤有一定的保护作用。且20mg/kg和40mg/kg剂量组表现出显著差异，其中20mg/kg剂量组的效果较优。关键词：微生物，发酵，生晒参，人参茎叶总皂苷，人参皂苷CK，急性肾损伤IIAbstractInthisstudy,fourmicrobialstrainswereselected,Bacilluscoagulans,Escheri