血涂片制备、形态学

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1、长治医学院附属和平医院检验科作业指导书文件编号:HPML-PD标题：血涂片制备及细胞形态学检查版本号：A修改号：0文件编号:HPDLM-P-SOP-XYJY-003生效日期：编制人：韩素丽发布部门：批准人：页码：第1页共5页1　目的将血液制成血涂片，经染色后在显微镜下进行细胞形态观察，帮助临床医师诊断疾病。2　原理把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色。细胞染色包括物理吸附及化学亲和作用。不同的细胞种类及细胞的不同成分，对酸性及碱性染料的结合能力不同，而使各种细胞呈现出各自的染色特点。在显微镜下根据各类细胞的形态特点和颜色差异将白细胞进行分类并计数，通常分类100个白细胞，计算各

2、种白细胞所占的百分比，同时对红细胞和血小板的形态进行观察。3　标本类型及采集要求3.1　采毛细血管血立即推制血涂片。3.2　用EDTA～K2抗凝静脉血，要求标本不能有溶血和凝集等现象。3.3　标本采集后要求及时制备成血涂片，以免细胞形态发生改变。3.4　血涂片制好后应立即染色，染色后的标本可以长时间存放。4　仪器、试剂4.1　OlympusCH20普通光学显微镜4.2　瑞氏-姬姆萨染色液珠海贝索生物技术有限公司（4×250ml），贮存于干燥、通风、远离火源、电源，防止剧烈振荡。5　操作步骤5.1　血涂片的制作过程：5.1.1　毛细血管血涂片的制作5.1.1.1　用毛细管常规取末梢血一滴(约

3、10ul)，滴加于载玻片的一端(距边缘约1.5cm，将推片放在血滴的前方，逐渐后移接触血滴，血液立即沿推片散开。也可用干燥洁净的推片直接抹一滴血，与载玻片接触后，血液立即沿玻片散开。5.1.1.2　然后将推片与载片保持30～45度角，平稳地向前推动至载片的另一端，载片上便留下一薄层的血膜。5.1.1.3　血膜制成后立即在空气中挥动，使其干燥，以免血细胞形态发生改变。5.1.1.4　血膜干燥后，用铅笔在厚血膜处写明病人姓名或编号。5.1.2　EDTA-K2抗凝静脉血涂片的制作5.1.2.1　将EDTA-K2抗凝静脉血标本充分混匀。第5页长治医学院附属和平医院检验科作业指导书文件编号:HPML

4、-PD标题：血涂片制备及细胞形态学检查版本号：A修改号：0文件编号:HPDLM-P-SOP-XYJY-003生效日期：编制人：韩素丽发布部门：批准人：页码：第2页共5页5.1.2.1　用毛细管取1滴血(约10ul)，置于载玻片的一端(距边缘约1.5cm)，将推片放在血滴的前方，逐渐后移接触血滴，血液立即沿推片散开。5.1.2.2　然后将推片与载片保持30～45度角，平稳地向前推动至载片的另一端，载片上便留下一薄层的血膜。5.1.2.3　血膜制成后立即在空气中挥动，使其干燥，以免血细胞形态发生改变。5.1.2.4　血膜干燥后，用铅笔在厚血膜处写明病人姓名或编号。5.2.　染色步骤：5.2.1

5、　用蜡笔在血膜两头划线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。5.2.2　用瑞-姬氏染液3～5滴覆盖整个血膜，固定1分钟。5.2.3　滴加染液量2～3倍的缓冲液，用吸尔球将其与染液吹匀，染色3～10分钟。5.2.4　慢慢摇动玻片，然后用流动水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥后，即可镜检。(也用滤纸吸干)5.3.　血涂片的显微镜的观察方法：5.3.1　先用低倍镜观察整张血片染色情况、白细胞的多少和细胞分布情况。5.3.2　选择血涂片的体尾交界处染色良好的区域，转换油镜下计数100～200个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求出各种白细胞所占比值(一般认为细胞分布在片头至片尾3/4区段比

6、较均匀，因此分类时必须在体尾交界处)。5.3.3　由血膜边缘向中央依次上下呈“墙垛”样顺序观察。5.3.4　同时观察红细胞、血小板的形态及其分布情况。5.3.5　注意有无寄生虫。6　计算方法通常数100个白细胞，计算各种白细胞所占的百分比，细胞数量多时应数200白细胞计算各种白细胞的百分比，细胞少时可只数50个白细胞，计算各白细胞的百分比。7　参考区间白细胞分类百分率(%)分数值绝对值中性杆状核粒细胞1～50.01～0.050.04～0.50中性分叶核粒细胞50～700.50～0.702～7嗜酸性粒细胞0.5～50.005～0.050.02～0.50嗜碱性粒细胞0～10～0.010～1第5

7、页长治医学院附属和平医院检验科作业指导书文件编号:HPML-PD标题：血涂片制备及细胞形态学检查版本号：A修改号：0文件编号:HPDLM-P-SOP-XYJY-003生效日期：编制人：韩素丽发布部门：批准人：页码：第3页共5页淋巴细胞20～400.2～040.8～4.0单核细胞3～80.03～0.080.12～0.80红细胞大小一致，呈双凹圆盘状，血小板形态正常。8　方法的局限性人为因素对该方法的影响较大，比如技术人员的