在兔动脉粥样硬化模型中生长素抑制动脉粥样硬化斑块血管生成和促进斑块的稳定性

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1、在兔动脉粥样硬化模型中生长素抑制动脉粥样硬化斑块血管生成和促进斑块的稳定性摘要斑块内血管生成与动脉粥样硬化斑块的不稳定性有关。在目前的研究中，我们调查了在家兔动脉粥样硬化模型中，生长素在斑块内血管生成和斑块不稳定性中的作用。家兔被随机的划分为三组，即，对照组、动脉粥样硬化模型组和生长素治疗组，每组持续治疗4周。我们发现，在生长素治疗组的家兔内膜与中膜的厚度比明显低于动脉粥样硬化组的家兔。生长素治疗组家兔的新生血管，血管内皮生长因子（VEGF）和血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）的数量，比动脉粥样硬化模型组减少的更明

2、显。在家兔动脉粥样硬化模型中，生长素明显减少斑块巨噬细胞，基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9的含量。此外，生长素治疗组家兔的促炎因子单核趋化蛋白（MCP）-1，比动脉粥样硬化模型组家兔明显降低。总之，生长素可以通过下调VEGF和VEGFR2的表达，来抑制斑块内血管生成和促进斑块的稳定性，在家兔动脉粥样硬化晚期抑制斑块巨噬细胞的含量和减少MCP-1的表达。1.介绍心血管疾病（CVD）是致死的原因之一，全球每年有1730万人口患病。动脉粥样硬化斑块破裂是急性心血管事件的主要原因，包括急性冠脉综合征（ACS），心脏损伤

3、和中风。病理研究显示脂质积累，基质降解和炎症与斑块的不稳定性和破裂有关。新血管的生产时斑块不稳定性的另一个重要因素。在动脉粥样硬化损伤中，新血管的生产可能会促进斑块的扩大，斑块内出血和破裂，这在动脉粥样硬化损伤的进展和易损性中起着关键的作用。抑制斑块内血管生成可能在提高斑块的稳定性，预防和治疗动脉粥样硬化心血管疾病（ASCVD）中发挥潜在的作用。生长素，一种28氨基酸酰化肽，主要从胃中释放，是一种生长激素促分泌素受体（GHSR）的内源性配体。生长素和GHSR在心血管系统和内皮细胞中表达，并且在心血管系统中产生保护作用。

4、先前的研究证实，生长素可以抑制动脉粥样硬化损伤的发展。此外，生长素在人类冠状动脉粥样硬化中上调了3-4倍，表明生长素在动脉粥样硬化斑块的发展中起关键的作用。同样重要的是，生长素被认为是血管生成的内源性调节因子并且可能抑制血管的生成。然而，生长素对斑块内血管生成的作用和它的作用机制还没有被展开研究。在当前的研究中，我们在体内实验中检测生长素在斑块内血管生成和斑块的不稳定性中的作用。我们的数据证实，在家兔晚期动脉粥样硬化中，生长素通过下调VEGF和VEGFR2的表达，抑制斑块中巨噬细胞、MMP-2、MMP-9的含量，减少M

5、CP-1的表达，来抑制新血管的生成和促进斑块的稳定性。2.材料和方法2.1动物模型动物使用严格的在重庆医科大学伦理机构委员会和中国国家科学技术委员会的批准下，按照实验动物的保护和使用指南进行。36只雄性新西兰大白兔，体重2.5-3.5kg（3个月大），随机的划分为3组：对照组（n=12），动脉粥样硬化模型组（n=10），生长素治疗组（n=11）。动脉粥样硬化模型组和生长素治疗组在前两周和腹主动脉球囊损伤后7周喂1%胆固醇饮食（120-140g/day）。兔子通过戊巴比妥钠麻醉（30mg/kg），腹主动脉球囊损伤通过3.

6、5F的球囊管从右侧股动脉到胸主动脉产生。此后，气球膨胀在10-12atm（1atm=101.325Pa），导管轻轻的朝着髂骨动脉回缩。每只兔子进行这步操作3次，确保腹主动脉被适当的损伤。在9周末，兔子转变为正常饮食。对照组接受正常饮食和不接受手术干预。然后，对照组不接受额外的治疗，动脉粥样硬化模型组通过静脉注射无菌性生理盐水（NS），生长素治疗组通过静脉注射鼠生长素（25μg/kg/d）。注射4周，每天一次。在13周末，给兔子安乐死，收集组织做病理分析。2.2血脂分析在实验开始（0周），生长素治疗前（9周），生长素治疗

7、后（13周）从禁食过夜的兔子中收集血液。血清样品收集并且储存-80℃中，直到实验。总胆固醇（TC）的血清水平，甘油三酯（TG），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），使用商用试剂盒通过酶促实验进行测量。2.3组织学染色如前所述，兔子被过量的戊巴比妥钠静脉注射而安乐死。从每只兔子中，将腹主动脉切成3cm的片段，4%的多聚甲醛固定过夜，然后再切成两个相等的片段。一个片段用石蜡包埋，组织块被切成5μm厚，用苏木精，曙红和天狼星红染色。另一片段用冰冻切割，组织被切成5μm厚的薄皮，用油红O染色。2

8、.4免疫组化染色石蜡包埋的腹主动脉切片浸入10mmol/L的柠檬酸钠缓冲液（pH6.0）并且通过热的微波照射。将切片在3%的过氧化氢中孵育15分钟，抑制内生过氧化物酶活性。在脱蜡和复水后，切片与兔抗兔CD31抗体（1:500），鼠抗兔巨噬细胞（1:1000），兔抗兔MMP-2（1:500），MMP-9（1:500），兔抗兔MCP-