胰岛素纳米粒对大鼠实验性糖尿病的降血糖作用

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1、胰岛素纳米粒对大鼠实验性糖尿病的降血糖作用　　摘要:目的制备氰基丙烯酸正丁酯胰岛素纳米粒（insulinnanoparticlesINP），研究其理化特性，观察sc和po给药对糖尿病大鼠的降血糖作用.方法用改良的乳液聚合法制备氰基丙烯酸正丁酯胰岛素纳米粒，用透射电子显微镜观察INP的大小、形态，用高压液相色谱法（HPLC）测定其包裹率，用ip四氧嘧啶制备糖尿病大鼠模型.血糖用快速血糖仪测定.用t检验和χ2检验进行统计学处理.结果用改良的乳液聚合法制得的INP粒径为（30±0.5）nm，包裹率为95%

2、，给糖尿病大鼠sc30U・kg-1，INP组1h开始起作用，4～6h达峰值，血糖降低98%，作用持续24h，而普通胰岛素组1h达峰值，最大降血糖幅度为55%，作用持续4h.sc20U・kg-1，INP组1h开始起作用，4～6h达峰值，最大降血糖幅度为74%，作用持续20h，而鱼精蛋白锌胰岛素组1h开始起作用，4～6h达峰值，最大降血糖幅度为41%，作用也持续20h.给糖尿病大鼠poINP120U・kg-1，1d后空腹血糖开始下降，3d效果最佳，血糖降低89%

3、，5～7d后恢复高血糖，而po普通胰岛素组血糖无明显变化，2～4d的血糖两组比较相差显著P<0.05）.50U・kg-1组及100U・kg-1组作用持续时间均为5d，120U・kg-1组的作用时间为7d.三个剂量组最大降糖作用均在服药后3d.120U・kg-1组与100U・kg-1组1～5d的BDGP相差显著（P<0.05），100U・kg-1组与50U・kg-1组3d时的BGDP相差显著（

4、P<0.05）.结论胰岛素包入纳米粒后生物活性保存良好，sc后有缓释作用，po后有降血糖作用.　　Keyellitus，experi-mental　　Abstract:AIMToinvestigatethecharacteristicsofinsulin-nanoparticles（INP）andtheirhypoglycemiceffectontheal-loxan-induceddiabeticrats.METHODSINPprovedemulsionpolymerizationmetho

5、ds.Theentrap-mentefficiencyeasuredbyHPLC.Thediabeticratsindiameterentefficiency95%.SubcutaneouslyadministratedINPtoalloxan-induceddiabeticratsatadoseof30U・kg-1induced98%decreaseofbloodglucoseat4～6h.Theeffectlastedfor24h.-2000EX型透射电子显微镜是日本产品.　　1.

6、2方法　　胰岛素纳米粒的制备采用改良的乳液聚合法制备氰基丙烯酸酯胰岛素纳米粒，主要步骤:取蒸馏水60mL，加入0.2g非离子表面活性剂，普通胰岛素溶液20mL（40kU・L-1），适量的a-氰基丙烯酸正丁酯（BCA），反应1～2h，得到半透明的胶体溶液，即为胰岛素纳米粒胶体溶液.采用电子显微镜负染法观察纳米粒的大小及形态.用50g・L-1的醋酸铀溶液染色后，用透射电子显微镜观察（放大4～10万倍）.胰岛素包裹率的测定用高效液相色谱法.胰岛素纳米粒用蒸馏水充分透析后，分别取

7、透析前后的胰岛素等体积，用适量的乙腈溶解INP至透明的溶液，用高效液相色谱仪测定胰岛素含量.层析柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为pH值2.0的0.1mol・L-1磷酸盐缓冲液与乙腈按7/3比例混合而成的溶液.胰岛素的标准液用上海生化制药厂生产的胰岛素注射液.包裹率=透析后胰岛素浓度/透析前胰岛素浓度×100%.将新制备的胰岛素纳米粒置离心管中，以15000r・min-1离心60min，观察纳米粒有无分层、聚结或沉淀的现象.4℃放置5mo观察有无分层、聚结等现象.体

8、质量约200g的SD雄性大鼠，购自本校实验动物中心，在本实验室饲养5d，禁食24h，饮水不限，ip新鲜配制的50g・L-1四氧嘧啶生理盐水溶液175mg・kg-1，分别于给药后1，2，3，7和14d自尾尖取血测定血中葡萄糖浓度.2mol・L-1的大鼠被认为是糖尿病大鼠［3］.糖尿病大鼠随机分为3组，每组4只，分别sc同等剂量的胰岛素纳米粒（INP）、普通胰岛素（RI）或鱼精蛋白锌胰岛素（PZI），对照组用等量生理盐水（CONT