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《加味补肝汤对糖尿病大鼠坐骨神经中蛋白激酶cβ亚型表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、加味补肝汤对糖尿病大鼠坐骨神经中蛋白激酶Cβ亚型表达的影响论文.freelRNA表达的影响,探讨其对实验性糖尿病大鼠周围神经病变的防治作用。方法65只大鼠适应性喂养1周后,随机取20只为正常组,45只造模,以链脲佐菌素诱发糖尿病模型,将造模成功后的40只大鼠随机分为模型组、加味补肝汤组。分别于治疗后4、8周处死大鼠,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定坐骨神经中PKC-βⅡmRNA的表达。结果治疗后4、8周模型组大鼠PKC-βⅡmRNA表达明显高于正常对照组(P＜0.05),加味补肝汤组PKC-βⅡmRNA表达明显低于同期模型组(P＜0.05)。结论加味补肝汤对实验性糖尿病大鼠周围神
2、经病变有一定的防治作用。【关键词】加味补肝汤；糖尿病；坐骨神经；蛋白激酶Cβ亚型；大鼠Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofJiaentaldiabeticratandexploreitspreventiveandtherapeuticeffectsonperipheralneuropathyinexperimentaldiabeticrats.MethodsIn65ratsinvolved,45ratsadeasmodeland20odelodelratslydividedintomodelgroupandJiathebeginningoftreatme
3、ntrespectively,andPKC-βⅡmRNAofsciaticnerveerasechainreaction(RT-PCR).ResultsPKC-βⅡexpressionofthemodelgroupon4thor8thalcontrolgroup(P＜0.05),.freelarkedlyloodelgroup(P＜0.05).ConclusionJiaentaldiabeticrats.KeyL,浸泡30min,水煎40min,第2次煎时加水200mL,煎煮20min,取煎汁,混匀,水浴浓缩成每1mL含2.72g原药材的药液。1.3仪器TC-512型PCR仪(英国TECHNE
4、公司)；血糖仪(德国罗氏公司ACCU-CHEK)；Motic2000图像分析仪；MS302多媒体生物信号记录分析系统(广州中医药大学)。1.4试剂琼脂糖(北京鼎国公司)；溴化乙锭、链脲佐菌素(美国Sigma公司)；Trizol(MRC公司)；反转录(RT)试剂盒(美国MRI公司)；PreMixTaq(宝生物大连有限公司)；引物由上海生工生物技术有限公司合成；其他常规试剂由湘雅医院药剂科提供。2实验方法2.1分组65只大鼠适应性喂养1周后,随机取20只为正常组,45只造模,将造模成功后的40只大鼠随机分为模型组20只,加味补肝汤实验组20只。2组血糖值比较差异无统计学意义(P＞0.05)。2.2
5、造模及给药参照文献3方法。造模前禁食12h,一次性腹腔注射1%链脲佐菌素(50mg/kg,0.1mol/L柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液配制而成,pH4.2～4.5)诱发糖尿病,72h后用血糖仪测定尾尖血血糖,凡血糖＞16.7mmol/L为造模成功,造模不成功的大鼠按上述方法重复1次。正常组20只大鼠禁食12h后一次性腹腔注射相等容积0.1mol/L的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。2.3血糖测定尾静脉取血,采用葡萄糖氧化酶法,罗氏公司ACCU-CHEK血糖仪及试纸条测定。2.4神经电生理检测参照文献4方法并略加改进,分别于治疗后4、8周末进行神经电生理检测。大鼠一次性腹腔注射10%水合氯醛(350mg/kg
6、),麻醉后俯卧固定,刺激电极置于坐骨切迹(刺激强度2.0mV,刺激波宽3.0ms),在踝部(远端)和右足二趾间分别插入记录电极,参考电极置于记录电极和刺激电极之间,并连接计算机MS302多媒体生物信号记录分析系统,记录远近端坐骨神经产生动作电位的潜伏期,测定两记录电极间的距离,神经传导速度为记录电极之间的距离/动作电位潜伏期之差。测定时保持被检测肢体温度在37℃左右。2.5标本收集分别于治疗后4、8周一次性腹腔注射10%水合氯醛(350mg/kg)麻醉,俯卧位固定,取左侧梨状肌下缘坐骨神经约1cm,置于液氮中,-80℃保存,用于mRNA检测。2.6反转录-聚合酶链反应①引物合成：用Primer
7、Premier5.0软件设计引物,由上海生工生物技术有限公司合成(见表1)。表1目的基因扩增引物序列（略）②组织总RNA提取：采用Trizol提取总RNA。按Trizol试剂说明书提取总RNA,溶解于20μLDEPC处理灭菌双蒸水,经2%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,并测定A260/A280比值在1.8～2.0之间,说明RNA样品纯度理想；于-70℃冻存。③反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)
