除草剂扑草净腐植酸对斑马鱼的毒理作用

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1、除草剂扑草净腐植酸对斑马鱼的毒理作用　　三氮苯类除草剂是目前国内外广泛使用的选择性内吸收传导型除草剂，可防除一年生禾本科杂草和阔叶杂草及某些多年生恶性杂草。扑草净（2-甲硫基-4,6-双异丙氨基均三氮苯，Prometryn）是三氮苯类除草剂中常见的一种，主要通过抑制植物的电子传输来影响植物的光合作用，从而达到除草的作用。　　在水产养殖业中也被频繁应用，主要用于清除鱼、虾、蟹、贝、海参等养殖水体中的丝状藻类（如浒苔）、大型草类及其他有害藻类。扑草净在欧洲已于2004年被禁用[1],但由于它毒性低、杀草谱广，目前中国[2]、美国、加拿大、新西兰、南非还在广泛使

2、用[3].　　扑草净在环境中比较稳定，半衰期为13个月，其较长的残效期，更容易在环境中残留并造成危害。有学者对渤海某海域60个站点海水分析后发现，扑草净的检出率为100%[4];上海某河水中也检测出扑草净，其浓度高达7.12~0.54μgL-1[5].马晓雁等[6]检测了上海某水厂（该水厂以黄浦江水为原水）中扑草净的平均浓度，结果表明4月扑草净的浓度最高，达到1.25μgL-1.有报道显示捷克的河流中扑草净的浓度为0.51μgL-1[7],希腊的地表水中扑草净的范围在0.91~4.40μgL-1,而在地下水中超过1μgL-1[

3、8].可见，扑草净在环境中不仅残留时间长，而且分布较为广泛。扑草净进入环境后会对非靶细胞生物造成影响。研究发现扑草净对月牙藻（Selenastrumcapricor-nutum）的5dEC50为0.023mgL-1[9],对浮萍（Lemnaminor）的24hEC50为0.083μmolL-1,对轮藻（Characanescens）的24hLC50为0.071μmolL-1[10].李雪芹等[11]发现扑草净对蛋白核小球藻（Chlorellapyrenoidosa）的EC50为0.16mgL-1,并且在低浓度（0.01mgL-1）下对蛋白核小球

4、藻表现出一定的刺激生长效应，而随扑草净浓度的增加，抑制生长作用增强，藻体内丙二醛含量急剧升高。Jiang等[12]发现扑草净能够抑制小麦的生长，表现为扑草净（4mgkg-1）能够导致叶绿素含量的大幅度降低，植物体脂质过氧化水平升高。　　可溶性有机质（DOM）通常被定义为能够透过0.45μm滤膜，且在以后的分析过程中不因蒸发而丢失的有机物质。在表面水体中的浓度（按溶解性有机碳DOC计）为1~15mgL-1[13].也有报道称天然水体中DOM的浓度范围为1~40mgL-1,江河中平均可达7mgL-1.腐植酸（Humicacid,HA）是DOM的主要组成部

5、分[14],在水环境中普遍存在，它不仅能对生物产生直接影响[15],还能够通过改变有机污染物的生物有效性间接影响生物。Cánepa等[16]以胆碱酯酶活性作为生物标志物，研究了在不同浓度（5、20、60mgL-1）HA存在条件下杀螟硫磷对双脐螺（B.glabrata）的影响，发现在20、60mgL-1HA条件下，杀螟硫磷处理组双脐螺体内胆碱酯酶的活性与空白组近似，说明该条件下高浓度HA的存在没有使杀螟硫磷的可利用性增加。　　扑草净的检测手段、在土壤和水环境中的吸附解吸[17]以及它对植物的影响[11-12]已有报道，而其对斑马鱼（Danior

6、erio）的毒性以及HA的存在对其毒性的影响未见报道。本研究考察了扑草净对斑马鱼的毒性，以及HA对扑草净毒性的影响，为评价扑草净对水生生物乃至非靶标生物的潜在威胁提供理论依据，对更好地控制和预测环境中扑草净污染情况具有重要意义。同时，以丙二醛（MDA）为测定指标，研究HA对斑马鱼的直接影响，并选择紫外-可见光吸收光谱法对扑草净和HA进行定性分析，探索HA影响扑草净对斑马鱼毒性的原因。　　1材料与方法　　　　1.1受试生物　　　　斑马鱼，购自天津市安琪花鸟虫鱼市场。斑马鱼为成鱼，平均体长2.9cm,平均体重0.13g.实验用水为充分曝气脱氯的自来水，pH7.

7、9,温度（24±2）℃。在实验室水族缸内驯养14d以上，每3d喂食一次，及时清理缸底粪便，试验前24h停止喂食，驯养期间自然死亡率<1%.驯养过程中去除受伤、体色异常、畸形个体，选择生长良好的鱼作为试验鱼，雌雄不限。　　1.2试验方法　　　　试验用水为曝气一周以上的自来水，采用自然光照。每个处理设置2个重复，处理系列均采用5L烧杯盛2L溶液，每个烧杯中放入10条斑马鱼，试验期间轻微曝气，周期为96h.试验前将烧杯用2%（质量分数）KMnO4消毒。　　扑草净（表1,纯度>97%,浙江省中山进出口有限公司）储备液以丙酮为助溶剂，45℃

8、超声30min后，过0.45μm有机滤膜，现配现用。标准曲线