趋化因子受体ccr7促进乳腺癌细胞的趋化与侵袭论文

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1、趋化因子受体CCR7促进乳腺癌细胞的趋化与侵袭论文马飞，宁力，张颖妹，徐兵河【关键词】乳腺肿瘤【Abstract】AIM:TostudythechemotaxisandinvasionofbreastcancercellsfacilitatedbyCCchemokinereceptor7(CCR7).METHODS:ReversetranscriptionPCRanalysisofCCR7edinthreebreastcancercelllines.Thechemotaxisandinvasionassaysedonbreastcancercellsinpresenceof

2、secondarylymphoidtissuechemokine(SLC),aligandofCCR7,andRNA.SLCmediatedchemotaxisandinvasioncouldbecheckedinthosebreastcancercells.BothchemotaxisandinvasioncouldbeblockedbyneutralizingantiCCR7antibody.CONCLUSION:ChemotaxisandinvasionofbreastcancercellscanbefacilitatedbyCCR7expression.CCR7ma

3、yplayanimportantroleinthelymphnodemetastasisofbreastcancer.【KeyokineSCC;receptors,chemokine;CCR7;breastneoplasms;lymphaticmetastasis【摘要】目的：研究趋化因子受体CCR7的表达对乳腺癌细胞趋化活性与侵袭活性的促进作用.方法：RTPCR法测定3株乳腺癌细胞MCF7,MDAMB231,MDAMB361中CCR7的表达；在CCR7的配体SLC作用下，通过趋化小室法检测不同乳腺癌细胞的趋化活性与侵袭活性；检测CCR7的封闭对乳腺癌细胞趋化活性和侵袭活性

4、的影响.结果：3株乳腺癌细胞中均存在不同程度CCR7的表达，其配体SLC对3种乳腺癌细胞均存在不同程度的趋化活性和侵袭活性，CCR7的封闭也能够在不同程度上抑制乳腺癌细胞的这种趋化活性和侵袭活性.结论：趋化因子受体CCR7的表达能够促进乳腺癌细胞的趋化与侵袭，从而可能在乳腺癌细胞向淋巴结转移中发挥重要作用.【关键词】趋化细胞因子类.freelphoidtissuechemokine）和ELC（EBI1ligandchemokine）在淋巴结中特异性高表达，而许多肿瘤细胞表面有CCR7的表达.研究证实，CCR7的表达与多种恶性肿瘤的淋巴结转移密切相关，其中包括食管癌［2］、胃

5、癌［3］、肺癌［4］等，然而CCR7是否也参与了乳腺癌淋巴结转移的形成，尚无定论［1］.为此，我们体外检测了不同乳腺癌细胞株CCR7的表达，并且评价了CCR7的表达对体外SLC介导的乳腺癌细胞的趋化与侵袭的影响，为进一步研究乳腺癌细胞向淋巴结转移的机制奠定了基础.1材料和方法1．1材料乳腺癌细胞株MCF7,MDAMB231,MDAMB361由本室常规传代培养；TrizolRNA提取试剂盒，购自LifeTechnologies公司；MMLV逆转录酶，DTT,DEPC等购自Gibco公司；OligodT15购自Promega公司；TaqDNA聚合酶、dNTPs购自TakaRa公

6、司；人趋化因子SLC由医科院肿瘤研究所张叔人教授惠赠；人CCR7mAb购自RDSystems公司；趋化小室与多聚碳酸酯膜（8.0μm孔径，25mm×80mm），购自Neutroprobe公司.1．2方法1.2.1乳腺癌细胞CCR7表达的检测各取1×106的不同乳腺癌细胞，按照TrizolRNA提取试剂盒说明提取细胞总RNA.取6μg总RNA与0.5μgoligodT15混合，逆转录获得cDNA.以其作为模板，PCR扩增CCR7中一大小为530bp的片段.所用的上游引物为5′TCCTTCTCATCAGCAAGCTGT3′，下游引物为5′GAGGCAGCCCAGGTCCTTGA

7、AG3′.具体反应步骤为：37℃1h，72℃5min，完成逆转录；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环完成PCR后，再72℃充分延伸10min.以人Tubulin作为内对照，其上游引物为5′CTCATCACAGGCAAGGAAGAT3′，下游引物为5′TTAAGGTAAGTGTAGGTTGGG3′，大小为410bp.扩增产物进行1.5g/L琼脂糖凝胶电泳，以各自Tubulin作为内对照调整上样量，电泳图像经FluorsMultiImager凝胶成像扫描仪分析，比较乳腺癌细胞中CCR7的相