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时间:2018-11-17
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1、趋化因子受体CCR7在乳腺癌淋巴结转移中的作用论文朱旬,甄林林,郑伟,王汉晋,王萱仪,武正炎【关键词】乳腺肿瘤;,转移;,淋巴结;,CCR7EffectofchemokinereceptorCCR7inbreastcancertissueonlymphnodemetastasis【Abstract】AIM:TodetecttheexpressionsofchemokinereceptorCCR7proteinanditsmRNAinbreastcarcinoma,andtodiscusstheirrelationshipphnod
2、emetastasis.METHODS:TheexpressionsofchemokinereceptorCCR7mRNAandproteinin42casesofbreastcarcinomaand10casesofbreastfibroadenomatissueerasechainreaction(RTPCR)andSPimmunohistochemicaltechnique.RESULTS:ThereRNAand15ofCCR7proteinin42casesofbreastcarcinomatissue.Thepositi
3、veexpressionrateofCCR7protein(11.1%)inpatientsnodemetastasisnodemetastasis(P<0.01).ThepositiverateinclinicalstageⅠ,ⅡandⅢphnodemetastasisasaycontributetolyphmnodemetastasisinbreastcancer.【Keya;metastasis;lymphnode;CCR7【摘要】目的:探讨趋化因子受体CCR7在乳腺癌中的表达意义.方法:应用RTPCR及免疫组织化学方法检测
4、42例乳腺癌组织和10例乳腺纤维腺瘤中CCR7的表达.结果:在乳腺癌组织中CCR7mRNA表达42.9%,CCR7蛋白表达35.7%,在乳腺纤维腺瘤中仅有1例CCR7mRNA表达.无淋巴结转移者CCR7蛋白阳性表达率为11.1%(2/18).freelokinereceptor7)在多种免疫细胞上表达,它及其配体在引导这些细胞向淋巴组织或器官归巢中起主导作用.最近的研究发现,它也在恶性肿瘤细胞上表达,并且在肿瘤细胞淋巴道转移过程中起重要作用.我们检测乳腺癌细胞株和乳腺癌组织中CCR7的表达水平,以及与淋巴结转移的关系.1材料和方法
5、1.1材料人乳腺癌MDAMB231和MDAMB435s细胞培养用含100mL/L胎牛血清的L15培养液(Gibco公司),人乳腺癌MCF7细胞培养用含100mL/L胎牛血清的DMEM培养液(Gibco公司),培养条件为37℃,50mL/LCO2饱和湿度.200403/200412在江苏省人民医院行乳腺癌手术42例,乳腺纤维腺瘤10例,均为女性,乳腺癌患者年龄29~72(中位43)岁,手术后常规病理诊断确诊为乳腺癌,并进行免疫组织化学检测ER,PR.1.2方法1.2.1RTPCR组织100mg在液氮中研碎后,用Trizol试剂(In
6、vitrogen公司)提取总RNA,并用紫外分光光度计测定RNA浓度.采用逆转录试剂盒(Promega公司,A3500)合成cDNA,配制20μL反应体系:RNAsin20U,Oligo(dT)150.5μg,RNA模板1.5μg,逆转录缓冲液1mmol/L,AMV反转录酶15U,dNTPs1mmol/L,MgCl225mmol/L,混匀后42℃反应1h,95℃5min,4℃放置10min.PCR反应体系50μL:模板cDNA(约50ng),上、下游引物(各50pmol/L),94℃4~5min,立即冰浴,瞬时离心,加入PCR缓冲
7、液(4.8μL),MgCl2(3.8μL),dNTPs(0.9μL),Taq酶(Promega公司,M1661)2.5U,最后加无核酸酶的水定容为50μL.RTPCR引物:上游5′AAGGGTCAGGAGGAAGAGGA3′,下游5′GGCTGGTCGTGTTGACCTAT3′(102bp).反应条件为:95℃预变性5min,94℃60s,56℃60s,72℃60s,30个循环.同时应用βactin作为内对照,引物:5′CGGTTGGCCTTGGGGTTCAGGGGG3′,下游5′ATCGTGGGGGCGCCCCAGGCACCA3
8、′(242bp),引物由上海华诺生物科技有限公司合成.PCR产物5μL经20g/L琼脂糖凝胶电泳观察.1.2.2免疫组织化学采用SP法,鼠抗人CCR7一抗(RD公司),其他试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司.用已知阳性结果标本切片作为阳性对照,
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