趋化因子受体ccr7在乳腺癌淋巴结转移中的作用论文

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1、趋化因子受体CCR7在乳腺癌淋巴结转移中的作用论文朱旬，甄林林，郑伟，王汉晋，王萱仪，武正炎【关键词】乳腺肿瘤；,转移；,淋巴结；,CCR7EffectofchemokinereceptorCCR7inbreastcancertissueonlymphnodemetastasis【Abstract】AIM:TodetecttheexpressionsofchemokinereceptorCCR7proteinanditsmRNAinbreastcarcinoma,andtodiscusstheirrelationshipphnod

2、emetastasis.METHODS:TheexpressionsofchemokinereceptorCCR7mRNAandproteinin42casesofbreastcarcinomaand10casesofbreastfibroadenomatissueerasechainreaction(RTPCR)andSPimmunohistochemicaltechnique.RESULTS:ThereRNAand15ofCCR7proteinin42casesofbreastcarcinomatissue.Thepositi

3、veexpressionrateofCCR7protein(11.1%)inpatientsnodemetastasisnodemetastasis(P＜0.01).ThepositiverateinclinicalstageⅠ,ⅡandⅢphnodemetastasisasaycontributetolyphmnodemetastasisinbreastcancer.【Keya;metastasis;lymphnode;CCR7【摘要】目的：探讨趋化因子受体CCR7在乳腺癌中的表达意义.方法：应用RTPCR及免疫组织化学方法检测

4、42例乳腺癌组织和10例乳腺纤维腺瘤中CCR7的表达.结果：在乳腺癌组织中CCR7mRNA表达42.9%，CCR7蛋白表达35.7%，在乳腺纤维腺瘤中仅有1例CCR7mRNA表达.无淋巴结转移者CCR7蛋白阳性表达率为11.1%（2/18）.freelokinereceptor7）在多种免疫细胞上表达，它及其配体在引导这些细胞向淋巴组织或器官归巢中起主导作用.最近的研究发现，它也在恶性肿瘤细胞上表达，并且在肿瘤细胞淋巴道转移过程中起重要作用.我们检测乳腺癌细胞株和乳腺癌组织中CCR7的表达水平，以及与淋巴结转移的关系.1材料和方法

5、1.1材料人乳腺癌MDAMB231和MDAMB435s细胞培养用含100mL/L胎牛血清的L15培养液（Gibco公司），人乳腺癌MCF7细胞培养用含100mL/L胎牛血清的DMEM培养液（Gibco公司），培养条件为37℃，50mL/LCO2饱和湿度.200403/200412在江苏省人民医院行乳腺癌手术42例，乳腺纤维腺瘤10例，均为女性，乳腺癌患者年龄29～72（中位43）岁，手术后常规病理诊断确诊为乳腺癌，并进行免疫组织化学检测ER，PR.1.2方法1.2.1RTPCR组织100mg在液氮中研碎后，用Trizol试剂(In

6、vitrogen公司)提取总RNA，并用紫外分光光度计测定RNA浓度.采用逆转录试剂盒（Promega公司，A3500）合成cDNA，配制20μL反应体系：RNAsin20U，Oligo(dT)150.5μg，RNA模板1.5μg，逆转录缓冲液1mmol/L，AMV反转录酶15U，dNTPs1mmol/L，MgCl225mmol/L，混匀后42℃反应1h，95℃5min，4℃放置10min.PCR反应体系50μL：模板cDNA（约50ng），上、下游引物（各50pmol/L），94℃4～5min，立即冰浴，瞬时离心，加入PCR缓冲

7、液（4.8μL），MgCl2（3.8μL），dNTPs（0.9μL），Taq酶（Promega公司，M1661）2.5U，最后加无核酸酶的水定容为50μL.RTPCR引物：上游5′AAGGGTCAGGAGGAAGAGGA3′,下游5′GGCTGGTCGTGTTGACCTAT3′(102bp).反应条件为:95℃预变性5min，94℃60s,56℃60s，72℃60s，30个循环.同时应用βactin作为内对照，引物：5′CGGTTGGCCTTGGGGTTCAGGGGG3′，下游5′ATCGTGGGGGCGCCCCAGGCACCA3

8、′（242bp），引物由上海华诺生物科技有限公司合成.PCR产物5μL经20g/L琼脂糖凝胶电泳观察.1.2.2免疫组织化学采用SP法，鼠抗人CCR7一抗（RD公司），其他试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司.用已知阳性结果标本切片作为阳性对照，