解毒利肺口服液对病毒性肺炎小鼠免疫功能的影响论文

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1、解毒利肺口服液对病毒性肺炎小鼠免疫功能的影响论文石世德，周民伟，李建军，郑文岭【关键词】解毒利肺口服液摘要：【目的】研究解毒利肺口服液(简称JLOL，主要由金银花、连翘、黄芩、川贝等组成)对感染病毒机体免疫系统的影响。【方法】60只小鼠随机分为5组：正常对照组、模型对照组、病毒唑组、JLOL大剂量组及JLOL小剂量组。运用流感病毒鼠肺适应株(FM1)感染小鼠制成病毒性肺炎模型，观察JLOL对病毒性肺炎小鼠血浆中细胞因子白细胞介素1(IL１）、白细胞介素2(IL2)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)水平的影响。【结

2、果】模型对照组与正常对照组比较，IL1及IFNγ水平降低，TNFα水平升高(均Ｐ＜001).freelL，混匀，静置，滤过，灌装，灭菌，即得；病毒唑注射液，江苏制药厂生产，批号020105。115试剂与仪器刀豆素A(ConA)、脂肪多糖(LPS)、萘替乙二胺、磺胺、植物血凝素(PHA)均为Sigma公司产品(美国)；放线菌素D(Serva公司产品)；2g/L结晶紫、10g/LSDS、RPMI1640培养基均为GIBCO公司产品(美国)；噻唑蓝(MTT)为Fluka公司产品(瑞士)；酶标仪：BioRed255型(美国)；CO２细胞

3、培养箱RKI1001B型(日本)；96孔细胞培养板(NUNC，丹麦)。12方法121动物分组及给药昆明种小鼠60只，随机分成5组，每组12只，分别为正常对照组、模型对照组、病毒唑组(009gkg－１d－１)、JLOL大剂量组(50gkg－１d－１)和JLOL小剂量组(25gkg－１d－１)。除正常对照组外，其他各组在感染病毒前分别灌服生理盐水、病毒唑和大、小剂量的JLOL2次，感染后灌胃12次，灌胃容量为每次05mL，每日2次。122动物感染方法及血浆制备各组小鼠轻度乙醚麻醉后，正常对照组用生理盐水滴鼻，每只50μL，其余各组以

4、同体积FM1病毒液感染，感染病毒量为24倍LD５０，于感染后第6天，摘眼球取血，肝素抗凝，分离血浆，置-20℃保存待测。123IL1测定采用胸腺细胞法［１］。按常规以5周龄C57BL/6小鼠，制备胸腺单个细胞悬液，调整细胞浓度至1×１０１０／Ｌ。取50μL加入96孔板后，分别加入体积比为1∶20稀释的待测血浆，每孔25μL，并设3复孔和阴性对照孔，再加PHA25μL/孔(终浓度为1mg/L)。置37℃、体积分数为5%CO２培养箱中培养72h后，以MTT法用酶标仪测吸光度D(570nm)值，以示各组动物血浆中IL1水平。124IL

5、2测定采用淋巴母细胞法［１］。用5周龄C57BL/6小鼠，无菌取脾脏，按常规制备单个细胞悬液。以含ConA(5mg/L)的5∶100小牛血清RPMI1640培养液调整细胞浓度至４×１０９／Ｌ，在温度为37℃，体积分数为5%CO２条件下培养48h，弃上清液并洗细胞后，再用体积比为1∶10小牛血清RPMI1640培养液调节细胞浓度至２×１０９／Ｌ；于96孔培养板内加入此细胞悬液，100μL/孔，并分别加入按1∶20稀释的各待测血浆100μL，设3复孔和阴性对照；置37℃，体积分数为5%的CO２培养箱中培养18h后，每孔吸弃100μL

6、上清液，采用MTT法，酶标仪测D(570nm)值，以示各组动物血浆中IL2水平。125INFα测定用结晶紫染色法［１］。按文献制备L929细胞，调整细胞浓度至１×１０８／Ｌ，将此细胞悬液加入96孔培养板，100μL/孔，置37℃、体积分数为5%CO２培养箱中培养；待长成单层细胞后分别加入按1∶20体积稀释的各待测血浆100μL/孔，并设3复孔，再加入放线菌素D20μL/孔(终浓度为1mg/L)，设阴性对照。置37℃、体积分数为5%CO２条件下培养24h后，以生理盐水洗3次，按常规加入2g/L结晶紫100μL/孔染色，10g/LS

7、DS脱色后，用酶标仪测D(570nm)值，以示各组动物血浆中TNFα水平。126IFNγ测定采用巨噬细胞NO2释放法［２，３］。以30g/L硫乙醇酸盐3mL注入BALB/c小鼠腹腔，3d后摘眼球处死，用含肝素(20U/mL)、无钙镁的冷Hanks液洗腹腔，收获巨噬细胞；4℃洗细胞后，用1∶20小牛血清RPMI1640培养液调节细胞浓度至１×１０９/L(活细胞超过95%)，加入96孔培养板，100μL/孔，置37℃、体积分数为5%CO２培养箱中培养48h，弃上清液后，分别加入按1∶20稀释的各待测血浆，50μL/孔；阴性对照孔以培

8、养液代替，并作3复孔，同时加20μg/L的LPS，50μL/孔；放37℃、体积分数为5%CO２培养箱中培养48h后，每孔取上清70μL，对应加入酶标板中，再加Griess液，70μL/孔，置室温10min后，阳性即显示樱桃红色。用酶标仪测D(530nm)值，以示