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1、RP-HPLC测定小承气汤中番泻苷A含量摘要:目的:建立小承气汤中番泻苷A的HPLC含量测定方法｡方法:采用SinochromC18柱(250mm×4.6mm),流动相:乙腈:水:冰醋酸(60:35:5),流速:1.0ml/min,检测波长:340nm｡结果:番泻苷A在0.2～1.0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=124.72X+6.5(r=0.9995)｡结论:所建立的HPLC方法可用于小承气汤的质量控制｡关键词:HPLC小承气汤番
2、泻苷A小承气汤出自《伤寒论》,适用于阳明腑实证，可以治疗粘连性肠梗阻､肠麻痹､慢性胃炎等[1]｡小承气汤现代处方：大黄12g､厚朴6g､枳实9g,水煎服[2]｡有关小承气汤的质量研究文献报道很少，胡晓静等测定了小承气汤中的大黄酸和厚朴酚的含量[3],而大黄中番泻苷A的含量测定则未见报道｡本文通过HPLC测定小承气汤中番泻苷A的含量,为小承气汤今后的深入研究提供参考｡1材料与方法1.1仪器与试剂1.
3、1.1仪器BF-KNAUER高效液相色谱仪,K-501高压输液泵,K-2501紫外分光检测器,BF-2002色谱工作站;FA21045万分之一电子天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂)｡TY-CZ1006超声波清洗仪(常州天亿电子设备有限公司)1.1.2药材与试剂药材购于长沙市老百姓大药房,经本校生药教研室鉴定,大黄为RheumofficinaleBaill的根茎;枳实为CitrusanrantiumL.的干燥幼果;厚朴为MagnoliaofficinalisRehd.etWils番泻苷A
4、(日本纯药工业株式会提供)｡乙腈为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯｡1.2实验方法1.2.1小承气汤的制备按处方比例分别称取大黄12g､厚朴6g､枳实9g,按参考文献方法精密加入10倍量水浸泡1h后,电炉直火加热回流1h[4],冷却至室温,抽滤即得小承气汤样品液｡1.2.2阴性对照液的制备按处方比例称取厚朴6g､枳实9g,按2.1进行制备,得阴性小承气汤样品液｡1.2.3大黄煎煮液的制备称取大黄12g,按2.1进
5、行制备,得大黄单煎液｡2结果番泻苷A的测定｡2.1色谱条件依立特Sinochrom5C18柱(250mm×4.6mm);流动相:乙腈:水:冰醋酸(60:35:5);流速:1.0ml/min;柱温:30℃;检测波长:340nm;进样量:20μl｡2.2标准曲线的绘制精密称取番泻苷A5mg,以pH8.0的磷酸缓冲液溶解,并定容至50ml,得番泻苷A贮备液｡精密吸取该溶液5ml，用70%甲醇定容至10ml,在所设定的HPLC条件下,以上述溶液分别进样4μl&
6、#65380;6μl､8μl､10μl､20μl,以峰面积（Y）为纵坐标,进样量(X，μg)为横坐标,得到标准曲线为Y=12472X+265(r=0.9995)｡2.3精密度试验取上述番泻苷A溶液,在上述色谱条件下测定,重复进样5次,结果番泻苷ARSD为1.97%，结果表明,进样精密度良好｡2.4稳定性实验取小承气汤样品溶液按“样品液中番泻苷A含量测定”项下方法处理,分别于0,2,4,8,12,24h对样品进行分析,RSD为3.2%
7、5377;2.5重复性实验取小承气汤样品溶液3份(每份25ml)，按“样品液中番泻苷A含量测定”项下方法处理,测定并计算番泻苷A含量,RSD为2.2%｡2.6大黄药材中番泻苷A的含量测定[5]精密称取大黄粉末5g入具塞试管中,精密加入pH58.O的磷酸盐缓冲液20ml,40℃超声波提取30min，3000r/min离心10min，精密量取5ml，加70%甲醇定容至10ml,按上述条件,进样量为10μl,测得原药材中番泻苷A的含量为0.28mg/g｡2.7样品液中番泻苷A含量测定:
8、分别精密量取各样品溶液25ml，60℃水浴上蒸干，加入pH8.0的磷酸盐缓冲液20ml，40℃超声波提取30min，3000r/min离心10min，精密量取5ml，加70%甲醇定容至10ml，按上述条件,进样量为20μl,番泻苷A含量(μg/ml)结果:大黄单煎液18.76,小承气汤样品液19.04,阴性对照液(-)｡色谱图见图1,图2｡2.8加样回收率实验精密量取小承气汤样品溶液3
