biolog接种液配制方法

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1、接种液制备方法一、GN/GP-IF（革兰氏阴性阳性菌接种液）配方如下：0.40%sodiumchloride(NaCl)氯化钠(维持渗透压)0.03%PluronicF-68(e.g.,Sigma#P7061)聚醚F-68(一种非离子表面活性剂，可降低表面张力，使菌体易于分散在水中)0.02%GellanGum(e.g.,Phytagel,Sigma#P8169)吉冷胶(一种食用胶，可增大液体粘度，使菌体均匀分散不易沉降)制备过程如下：1.加0.2克GellanGum至1升水中；2.煮沸并持续搅拌，直至GellanGum完全溶解；3.停止加热，继续搅拌；4.加4克NaCl，搅拌至完全溶解

2、；5.加0.3克聚醚F-68，搅拌至完全溶解；6.分装到20×150mm的试管中，每管装19mL左右；7.在121℃下灭菌30分钟，备用。二、AN-IF（厌氧菌接种液配置方法）1．在1升的耐热玻璃容器中加入750ml纯净水，然后加入下列试剂：3.0gNaCl0.63gNaHCO30.225gPluronicF-68聚醚F-68(一种非离子表面活性剂，可降低表面张力，使菌体易于分散在水中)0.15gPhytagel1.将玻璃容器放在加热板上，盖子稍微旋松并开始低速磁力搅拌。开启加热开关，加热使溶液沸腾，溶液会变得澄清。再加热至完全沸腾，直到泡沫上升到瓶颈。2.旋紧盖子，将容器从加热板上移走，

3、立即放到高压灭菌器中灭菌30分钟。3.当高压灭菌器冷却到80-90℃时，打开高压灭菌器再次旋紧盖子。然后马上将玻璃容器放入厌氧培养箱。4.在厌氧培养箱中，旋开盖子。用和泵相连的移液管将培养箱中的气体泵入溶液中吹洗溶液，直到形成的泡沫到达玻璃容器的颈部（或约20分钟）。5.向容器中加入1.125ml1%的巯基乙酸钠（Na-thioglycolate）溶液，混合均匀。盖上盖子（稍微有点松），过夜冷却。6.第二天向玻璃容器中加入0.375ml0.15%的亚甲基绿（methylenegreen），加入前溶液必须为常温，混合均匀，观察容器，溶液呈蓝绿色。在一天内，蓝绿色会还原成无色，如果48小时后溶

4、液还没有澄清，向溶液中再加入0.1ml1%的巯基乙酸钠溶液，如果需要可以重复再加入，但不能超过0.5ml。丢弃不能还原成澄清的溶液。7.所有的试管和盖子、移液管和移液器在使用之前应提前48小时放入厌氧培养箱，以便除去残留氧气。8.利用移液器或连续注射器在每个无菌玻璃试管（20×113mm）中加入14ml接种液，旋紧盖子。9.把装有接种液的试管保存在厌氧培养箱或厌氧罐里，不能直接保存在有氧气的环境中。三、FF-IF：用于鉴定丝状真菌时配制菌悬液用配方：0.03%Tween40(e.g.,Sigma#P1504)吐温400.25%GellanGum(e.g.,Phytagel,Sigma#P

5、8169)吉冷胶制备过程如下：1.将1升水加热至沸腾；2.加2.5克GellanGum和0.3克吐温40，搅拌；3.停止加热，继续搅拌至完全溶解，溶解呈透明状；4.分装到20×150mm的试管中，每管装16mL左右。5.在121℃下灭菌30分钟，备用。