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时间:2018-07-09
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1、接种液制备方法一、GN/GP-IF(革兰氏阴性阳性菌接种液)配方如下:0.40%sodiumchloride(NaCl)氯化钠(维持渗透压)0.03%PluronicF-68(e.g.,Sigma#P7061)聚醚F-68(一种非离子表面活性剂,可降低表面张力,使菌体易于分散在水中)0.02%GellanGum(e.g.,Phytagel,Sigma#P8169)吉冷胶(一种食用胶,可增大液体粘度,使菌体均匀分散不易沉降)制备过程如下:1.加0.2克GellanGum至1升水中;2.煮沸并持续搅拌,直至GellanGum完全溶解;3.停止加热,继续搅拌;4.加4克NaCl,搅拌至完全溶解
2、;5.加0.3克聚醚F-68,搅拌至完全溶解;6.分装到20×150mm的试管中,每管装19mL左右;7.在121℃下灭菌30分钟,备用。二、AN-IF(厌氧菌接种液配置方法)1.在1升的耐热玻璃容器中加入750ml纯净水,然后加入下列试剂:3.0gNaCl0.63gNaHCO30.225gPluronicF-68聚醚F-68(一种非离子表面活性剂,可降低表面张力,使菌体易于分散在水中)0.15gPhytagel1.将玻璃容器放在加热板上,盖子稍微旋松并开始低速磁力搅拌。开启加热开关,加热使溶液沸腾,溶液会变得澄清。再加热至完全沸腾,直到泡沫上升到瓶颈。2.旋紧盖子,将容器从加热板上移走,
3、立即放到高压灭菌器中灭菌30分钟。3.当高压灭菌器冷却到80-90℃时,打开高压灭菌器再次旋紧盖子。然后马上将玻璃容器放入厌氧培养箱。4.在厌氧培养箱中,旋开盖子。用和泵相连的移液管将培养箱中的气体泵入溶液中吹洗溶液,直到形成的泡沫到达玻璃容器的颈部(或约20分钟)。5.向容器中加入1.125ml1%的巯基乙酸钠(Na-thioglycolate)溶液,混合均匀。盖上盖子(稍微有点松),过夜冷却。6.第二天向玻璃容器中加入0.375ml0.15%的亚甲基绿(methylenegreen),加入前溶液必须为常温,混合均匀,观察容器,溶液呈蓝绿色。在一天内,蓝绿色会还原成无色,如果48小时后溶
4、液还没有澄清,向溶液中再加入0.1ml1%的巯基乙酸钠溶液,如果需要可以重复再加入,但不能超过0.5ml。丢弃不能还原成澄清的溶液。7.所有的试管和盖子、移液管和移液器在使用之前应提前48小时放入厌氧培养箱,以便除去残留氧气。8.利用移液器或连续注射器在每个无菌玻璃试管(20×113mm)中加入14ml接种液,旋紧盖子。9.把装有接种液的试管保存在厌氧培养箱或厌氧罐里,不能直接保存在有氧气的环境中。三、FF-IF:用于鉴定丝状真菌时配制菌悬液用配方:0.03%Tween40(e.g.,Sigma#P1504)吐温400.25%GellanGum(e.g.,Phytagel,Sigma#P
5、8169)吉冷胶制备过程如下:1.将1升水加热至沸腾;2.加2.5克GellanGum和0.3克吐温40,搅拌;3.停止加热,继续搅拌至完全溶解,溶解呈透明状;4.分装到20×150mm的试管中,每管装16mL左右。5.在121℃下灭菌30分钟,备用。
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