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1、久泻灵冲剂对溃疡性结肠炎大鼠结肠病变氧化损伤的影响论文.freelechanism.MethodsUlcerativecolitismodelsmunemethodbinedulationof5%aceticacid.DA,NO,tNOSandiNOSconcentrationofthehomogenateofcolonmucousmembrane.ResultsJiuxielinggranulescouldmarkedlyimprovethelevelsofGSH-PxandSODactivity,arkedcurati
2、veeffectsonratsofulcerativecolonitisbyresistingoxygenfreeradicallesion,inhibitingthegenerationofNOandNOS,andenhancingtheactivityofantioxidase.Keyin离心30min,取上清液提纯用考马斯亮蓝测定蛋白质含量,冰箱保存备用。使用时加入完全福氏佐剂,模型组和久泻灵大、中、小剂量组于第1、14、21、28日分别于足跖内注射抗原2mg(末次注射不加佐剂)。并用醋酸诱导结肠急性溃疡,于第21、
3、28日用25%乌拉坦4mL/kg麻醉大鼠后,用特制包有圆头的软针头插入大鼠肛门内约8cm处结肠内,注入5%醋酸1mL。空白组大鼠相同时间于足跖内、肛门内约10cm处结肠内注入等量生理盐水。1.4给药造模结束后,久泻灵冲剂大(13.5g/kg)、中(6.75g/kg)、小剂量(3.375g/kg)组配置成不同浓度的溶液,分别按2mL/次,2次/d灌胃；阳性对照组予柳氮磺胺吡啶(SASP,0.2g/kg),2mL/次,2次/d灌胃；空白对照组与模型组每日给予生理盐水2mL/次,2次/d。各组连续灌胃2周。1.5结肠组织标本制备
4、及指标检测断头处死大鼠,低温条件下快速取结肠组织,以冰冷的生理盐水冲洗,滤纸吸干,称重后用眼科小剪刀尽快剪碎,置于匀浆器中,用9倍生理盐水匀浆(匀浆器的末端置于放冰块的冷水中),后以3500r/min离心10min,取上清液置4℃冰箱保存。结肠组织GSH-Px、SOD、MDA、NO、NOS由甘肃中医学院医学基础实验教学中心生化实验室检测,组织蛋白浓度通过考马斯亮蓝法测定,具体操作严格按说明书进行。1.6统计学方法应用SPSS11.5软件处理数据,实验数据以x±s表示,统计方法采用方差分析检验,组间比较在方差齐时采用LSD法
5、,方差不齐采时采用DentT3法,P＜0.05为差异有统计学意义。2结果2.1一般情况正常组大鼠活泼好动,体重持续增长,大便正常。其他各组大鼠造模后均出现弓背蜷卧、懒动厌食,体重普遍下降。模型组大鼠稀便或半稀便,部分潜血阳性或肉眼黏液脓血便,多有肛周体毛沾染痕迹,且多数稀便持续到实验结束。与模型组比较,久泻灵大、中剂量以及阳性对照组组则随着治疗的延续,大鼠症状均有不同程度的改善,摄食量普遍增加,体重恢复较快,大便成形也较早。2.2久泻灵冲剂对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛、超氧化物歧化酶、一氧化氮
6、、一氧化氮合酶含量的影响(见表1)表1UC大鼠结肠组织匀浆中GSH-Px、SOD、MDA、NO、tNOS、iNOS含量变化(略)注：与正常对照组比较,▲P＜0.05,▲▲P＜0.01,▲▲▲P＜0.005；与模型组比较,△P＜0.05,△△P＜0.01,△△△P＜0.0053讨论GSH-Px的作用是催化还原型谷胱甘肽生成氧化型谷胱甘肽,并能使有害的过氧化物还原为无害的羟基化合物,从而保护细胞膜结构和功能免受过氧化氢的氧化损伤,因此GSH-Px活性的变化也可反映机体抗氧化能力。而脂质过氧化反应的中间产物MDA间接反映机体内细
7、胞损伤的轻重和脂质过氧化的程度。SOD能抑制脂质过氧化反应,清除超氧阴离子,保护细胞免受损伤,其活性的高低常间接反映了机体清除自由基的能力。UC患者血清中NO水平明显增高,并与UC的病情呈一致的改变。NO参与了UC发生过程中的炎症和组织损伤,对UC活动期患者的结肠黏膜作还原型辅酶Ⅱ(NADPH)检测发现：黏膜隐窝中NADPH依赖性黄递酶(NADPH-diaphoresis,Nd)染色增多,表明在UC中有NOS存在,而在结肠黏膜层主要以iNOS为主4。由于结肠固有肌层中存在iNOS,UC患者合并有细菌的病原体的感染,产生大量
8、内毒素,使iNOS活性增强；另外,炎性细胞因子亦可使iNOS活性增强,进而导致NO升高。本研究显示：与空白对照组比较,模型组大鼠结肠组织MDA含量升高(P＜0.01),SOD、GSH-Px计数水平显著降低(P＜0.01,P＜0.05),NO、TNOS及iNOS含量升高(P＜0.001),说明急慢性病变复
