重组人血管内皮抑制素冻干粉针剂研制及质量评价

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1、重组人血管内皮抑制素冻干粉针剂研制及质量评价【摘要】目的研究重组人血管内皮抑制素(endostar)冻干粉针剂的制备和质量控制。方法以4%甘露醇、2%蔗糖、30mm乙酸钠为辅料，将endostar制备成冻干粉针剂。分别采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和高效液相法(HPLC)分析冻干粉的纯度，使用人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)分析冻干粉的活性，其他检测项目按照《中国药典》进行。结果Endostar冻干粉的纯度大于99%，生物学活性每支含量2.4×10��5�U，等电点主区带在8.8~9.8之间，冻干粉用胰蛋白酶消

2、化后，肽图与理化对照品一致。结论按照此工艺制备的endostar冻干粉针剂各项指标均符合《中国药典》要求。�【关键词】血管内皮抑制素；冻干粉；纯度；生物学活性；肽图ProductionandQualityResearchofRecombinantHumanEndostatinFreeze-driedPowderLIUWu,YAOXue-jing,LIZhuang-lin.ShandongSimcere-MedgennBio-PharmaceuticalCo.,Ltd,Yantai264006,China� 7【Abstrac

3、t】ObjectiveTopreparerecombinanthumanendostatin(endostar)freeze-driedpowderandresearchitsquality.MethodsEndostarfreeze-driedpowderwaspreparedwith4%mannitol,2%sucrose,30mMsodiumacetate.TheproductpuritywasanalysedbySDS-PAGEandHPLC,andbiologicalactivitywasmeasuredwithH

4、UVEC.Othertestmethodswereperformedaccordingtochinesepharmacopoeia.ResultsThepurityofendostarfreeze-driedpowderwasmorethan99%.Thebiologicalactivitywas2.4±10��5�Uperpieceandisoelectricpointwasbetween8.8~9.8.Thepeptidemappingofendostarfreeze-driedpowderwasconsistentwi

5、threferencesubstance.ConclusionEndostarfreeze-driedpowderpreparedinaccordancewiththeprocesswereinlinewithchinesepharmacopoeiastandards.�【Keywords】Endostatin;Freeze-driedpowder;Purity;Biologicalactivity;Peptidemapping� 7�作者单位:264006烟台,山东先声麦得津生物制药有限公司血管内皮抑制素是1997年O�R

6、eilly等从小鼠血管内皮瘤的细胞培养液中分离获得的天然蛋白分子，它是内皮细胞增殖、迁移和新生血管生成的专一性抑制剂[1]，后来经证实是胶原XVIIINC1结构域C末端的多肽片段[2]。重组人血管内皮抑制素注射液于2005年9月在我国上市，主要用于非小细胞肺癌等恶性肿瘤的治疗，并且具有无毒副作用、不容易产生耐药性等优点[3,4]。但由于重组人血管内皮抑制素水针剂需要低温储藏和冷链运输，因此其冻干粉针剂的研制和质量控制具有重要意义。�1仪器与材料�1.1设备、仪器和细胞西林瓶灌装机(长沙楚天)；LYO-13冻干机(上海东富龙公

7、司)；电泳仪(Bio-Rad公司)；CO��2�培养箱(Sanyo公司)；酶标仪(ThermoScientific公司)；HP1100型高效液相色谱仪(Agilent公司)；C��18�反相柱，粒度5μm，孔径300�，4.6mm×25cm(Vydac公司)；HUVEC细胞株(本室保存)。�1.2药品和试剂7Endostar原药(批号YY2009024，浓度10.2mg/ml)、理化对照品(批号BZ08013，浓度2.64mg/ml)、活性标准品(批号BZ09001，每支7.5mg，含1.2×10��5�U活性单位)均为山东

8、先声麦得津生物制药有限公司生产；内皮细胞培养基(ECM)(Sciencell公司)；胰蛋白酶(Sigma公司)；三氟乙酸，分析纯，(E.Merk公司)；乙腈，色谱纯(FisherScientific公司)；甘露醇(山东洁晶集团)；蔗糖(湖南尔康制药)；三水合乙酸钠(北京燕京药业)；MTS染