实验八 果蝇的单因子实验

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1、实验八果蝇的单因子实验09级生物技术02班杨亚琼20091052220一：目的1.理解分离定律的原理；2.掌握果蝇的杂交技术；3记录交配结果和掌握统计处理的方法。二．原理一对基因在杂合状态中保持相对的独立性，而在配子形成时，又按原样分离到不同的配子中去。理论上配子分离比是1:1，子二代基因型分离比是1:2:1，若显性完全，子二代表型分离比是3:1。这就是分离定律。孟德尔从豌豆中选取了许多稳定的，易于观察的性状观察分析。所谓的性状是生物体所表现的形态特征和生理特性的总称。孟德尔在研究豌豆等植物的性状遗传时，把植株所表现的性状总体区分为各个单位作为研究对象，这些被区分开的每一个具体

2、性状称为单位性状（unitcharacter）.如豌豆的花色，种子形状，子叶颜色，豆荚形状，未成熟豆荚的颜色，花序着生部位和株高等性状。不同个体在单位性状上常有着各种不同的表现，如豌豆有红花和白花，种子形状有圆粒和皱粒，子叶颜色有黄色和绿色等。这种同一单位性状在不同个体间所表现出来的相对差异，称为相对性状。果蝇的长翅（+）和残翅（vg）是一对相对性状。它们是位于常染色体上的一对等位基因。野生型果蝇的双翅是长翅，（+/+）翅长过尾部。残翅果蝇（vg/vg）的双翅几乎没有，只有少量残痕，无飞翔能力。vg的座位是第二染色体67.0。长翅对残翅显性完全。交配方式：用长翅果蝇与残翅果蝇交

3、配，得到子一代都是长翅，子一代雌雄个体间相互交配，子二代产生性状分离，出现两种表型，呈3:1之比。现以长翅雌蝇与残翅雄蝇交配为例P：长翅（♀）×残翅（♂）+/+↓vg/vgF1：长翅＋/vg↓♀.♂相互交配F2：长翅残翅(1+/+,2＋/vg)(1vg/vg)图1.果蝇双翅形状的遗传三．材料、仪器与试剂材料：黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)的两个品系：野生型：长翅果蝇(+／+)突变型：残翅果蝇(vg／vg)野生型果蝇的双翅为长翅(+／+)，翅长超过尾部。残翅果蝇(vg／，g)的双翅几乎没有，只留少量残痕，无飞翔能力。仪器设备：双筒解剖镜，恒温培养箱，天平

4、，培养瓶，麻醉瓶，毛笔、白瓷板,放大镜，棉花，镊子，大烧杯，电炉，玻璃棒，铁架台，漏斗，胶管，无数锥形瓶。药品试剂：乙醚、玉米粉、琼脂、葡萄糖、酵母粉、丙酸。四．步骤1.培养基的配制：4-5人为一组，按照所需的量配制相应的培养基。现在以300ml为例，培养基的配方如下：A：葡萄糖23.45g,琼脂2.345g，加蒸馏水150ml，煮沸溶解。B:玉米粉30.9375g,加水150ml，加热搅拌均匀后，在加2.625g酵母粉。将A和B混合加热成糊状后，加1.875ml丙酸，即可分装到培养瓶中。每瓶分装30ml左右，将瓶壁擦拭干净后，用纸包扎好后即可进行高压蒸汽灭菌。灭菌后在2到3天

5、内未发生霉变，即可用。培养过程中应注意的问题：1)培养基的防霉。因为酵母菌与霉菌生活环境相似，均为pH4．5～6．0。所以在培养基的配制、酵母液的制备乃至转管时瓶塞的取放等每一个细节都要按无菌操作的基本要求去完成，防止霉菌的污染。对于已经被霉菌大量污染的培养基应及时倒掉，不宜再用。2)培养的温度。温度对果蝇的生长发育繁殖至关重要。果蝇生活的最适温度为20～25℃。当温度降至0℃以下时，生活周期延至57d以上，生活力明最降低．而高于30℃时引起不育和死亡。因此，选培养箱培养最为妥当。3)保证果蝇种系的纯正。要想保证遗传学实验的杂交测试不受干扰．一定要保证亲本果蝇的纯正。如发现有从

6、瓶中逃逸者，必须捕杀。并且．经常对亲本果蝇进行性状检查．排除杂交者或突变者。4)酵母菌的选择。以往常常使用干酵母片，但其菌体活力较差．难以大量繁殖。现在改用发酵面包专用活性酵母粉来制备酵母菌液，效果较好。5)果蝇的复壮。由于长期在低温下生活，果蝇的生活力大大降低。因此，必须挑取个体较大，繁殖力较强的雌雄果蝇，装入新培养瓶，继续培养。2、交配方式：用纯系残翅果蝇(雌)与长翅果蝇(雄)交配，此为正交实验；反交实验以长翅果蜗为母本、残翅果蝇为父本，由此得F1代。F2代雌雄个体相互交配，F2代出现性状分离，如下图P残翅(♀)×长翅(♂)＋/＋vg/vg↓F1长翅（♀、♂）＋/vg↓F2

7、长翅、惨翅3、选野生型和残翅果蝇为亲本。雌蝇一定要选处女蜗，可在实验前2-3天陆续收集，雌雄个体分开培养．数目多少根据需要而定。将雌雄果蝇放在一起培养，雌蝇的生殖器中有贮精囊，可保留交配所得的大量精子，雌蝇一次交配所得的精子，足够它多次排出的卵受精，因此在做杂交试验时，雌蝇必须选用处女蝇（没有交配过的雌蝇）。那么如何才能得到处女蝇呢？一般来说，刚羽化出来的果蝇在12小时之内是不进行交配的，所以在这段时间内选出的雌蝇即为处女蝇。为了保险起见，可以在羽化后的8小时内挑选。因此，在杂交实验开始的一