金蒿滴丸提取物纯化前后体外抗流感病毒作用对比研究论文

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1、金蒿滴丸提取物纯化前后体外抗流感病毒作用对比研究论文.freell，TI分别为6.4，5.6。结论金蒿滴丸提取物纯化后具有明显的抗流感病毒作用。【关键词】金蒿提取物;流感病毒金蒿滴丸由新疆一枝蒿ArtemsiarupestrisL.和贯叶金丝Hypericumperforatum两味药材制成，两味药材都具有解毒、抗过敏、抗菌、抗病毒及保肝等功效1,2。本文对金蒿滴丸粗提物及大孔吸附树脂纯化后的乙醇洗脱部位，通过体外实验进行抗流感病毒药效对比研究，为金蒿抗流感滴丸的研制及优化工艺提供药效学依据。1材料1.1病毒及细胞株甲型流感病毒(济防90-15)，

2、乙型流感病毒(济防97-13)，狗肾传代细胞MDCK，分别购自中国预防医科院病毒研究所。1.2细胞营养液培养液，含10%小牛血清、0.29mg谷氨酰胺/ml，100μg/ml青、链霉素的Eagle's(MEM)液;维持液，除所含小牛血清为2%外，其他均同细胞培养液。1.3药品1.3.1阳性对照药病毒唑，四川光大制药有限公司生产，批号0806027。1.3.2受试样品金蒿滴丸提取物纯化前样品及纯化后样品均由新疆药物研究所提供。受试样品的制备：取新疆一枝蒿和贯叶金丝桃药材，以70%的乙醇提取，提取液减压浓缩至无醇味，真空干燥得浸膏粉，实验前用高纯水配制

3、成16mg/ml的原药液，过滤除菌后备用，实验时按需要做倍比稀释，作为纯化前样品(G1)。取上述浓缩液调pH值为5，上HPD100大孔吸附树脂柱，用30%乙醇、70%乙醇分别洗脱，合并洗脱液，混匀，低温浓缩并干燥，实验前用高纯水配制成16mg/ml的原药液，过滤除菌后备用，实验时按需要做倍比稀释，作为纯化后样品(G2)。1.4动物昆明种小鼠，雌雄兼用，体质量18～22g，由新疆医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：新医动字(新)syxk2003-0001。1.5仪器BHC-1300ⅡA/B3型生物安全柜，苏净集团安泰公司产品;HH.CP-01型C

4、O2培养箱，上海福玛试验设备有限公司产品;XDS-1B倒置显微镜，日本Olympus产品;MDF-382E型超低温冰箱，江苏省金坛市医疗仪器厂产品;立式压力蒸气灭菌器，上海博迅实业有限公司医疗设备厂产品。2方法2.1测定药物对MDCK细胞的毒性3分别将原药液G1、G2和病毒唑用维持液稀释成1∶2，1∶4，1∶8…1∶128共7个浓度，加到接种MDCK细胞并已长成单层的96孔培养板中，100μl/孔，每稀释度4个复孔，同时设细胞对照。将培养板置37℃5%CO2培养箱中培养，每日观察细胞生长情况，确定细胞不出现明显退变的最低稀释倍数为最大无毒浓度(TC

5、0)，并按Reed-Muench法计算50%毒性浓度(TC50)。2.2测定药物对病毒致细胞病变(CPE)的影响4取已接种MDCK细胞并长成单层的培养板，吸弃培养液，分别接种100倍的半数组织培养感染剂量(100TCID50)的不同病毒液50μl，置37℃5%CO2培养箱中吸附1h后，吸弃病毒液，用Eagle,s维持液洗细胞表面2次,设细胞对照组、病毒对照组、病毒唑(取TC0及其以下的3个4倍稀释度共四个浓度)的给药组、金蒿纯化前后样品G1、G2不同浓度(取TC0及其以下的3个2倍稀释度共4个浓度)的给药组，4孔/组。给药组加入不同稀释度的药液，对

6、照组加维持液，100μl/孔。培养板置37℃，5%CO2培养箱中培养，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况，当病毒对照组细胞病变达4级时记录实验结果。细胞病变按六级标准判断，并按Reed-Muench法计算IC50，TI=TC50/IC50。:细胞生长正常，无病变出现;±：细胞病变少于整个单层细胞的10%;1：细胞病变约占整个单层细胞的25%以下;2：细胞病变约占整个单层细胞的50%以下;3：细胞病变约占整个单层细胞的75%以下;4：细胞病变约占整个单层细胞的75%以上。3结果3.1药物对MDCK细胞的毒性G1、G2对MDCK细胞的毒性作用表现为细胞增

7、殖缓慢，颗粒较多，形态改变、部分细胞破碎脱落。G1、G2对MDCK细胞的毒性作用随着药物浓度的降低而减轻。结果见表1。表1对MDCK培养细胞的TC0和TC503.2药物对病毒致细胞病变(CPE)的影响金蒿滴丸纯化前后样品G1、G2与病毒对照组相比，纯化前样品(G1)对甲、乙型流感病毒的抑制作用较弱;纯化后样品(G2)对甲、乙型流感病毒有明显的抑制作用，其IC50分别为118.88，136.18μg/ml，TI分别为6.4，5.6。结果见表2～3。4讨论近年来，对单、复方中药的抗流感病毒研究在国内日益受到重视，传统中药在防治流感方面有其独到之处。新疆

8、一枝蒿作为新疆地产药材，广泛的临床应用及大量的药理实验表明其具有抗过敏、抗氧化、抗病毒、保肝降酶、调节免疫等作用5，目前抗