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1、黄芪多糖对小鼠树突状细胞前体的体内诱导研究论文.freelg/kg剂量组,腹腔注射,体内诱导小鼠髓源性DC前体和未成熟DC,称量脾重,ELISA检测血清中GM-CSF表达量,倒置显微镜观察细胞生长状态,电镜检测细胞形态,流式细胞仪检测CD11c、MHC-Ⅱ类分子及协同刺激分子CD80、CD86表达水平。结果APS注射7d后,.freelg/kg组小鼠脾脏重量均较对照组有明显增加(P0.01),骨髓细胞体外分离并经rmGM-CSF、rmIL-4诱导培养后,流式细胞检测结果显示：APS100、200mg/kg组CD11c、MHC-
2、Ⅱ类分子表达水平高于对照组(P0.05),但CD80、CD86表达量较对照组无明显差异；血清中GM-CSF表达量,结果与对照组无明显差异。结论APS能诱导小鼠髓源性DC前体分化为DC,并可能有促进DC成熟的作用,但此作用并非通过刺激机体GM-CSF细胞因子的分泌而发挥作用。【关键词】树突状细胞；黄芪多糖；小鼠Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofastragaluspolysaccharide,aponentofanaqueousextractofAstragalusMembran
3、aceusroots,ondifferentiationandmaturationofdendriticcellsinvitro.Methods30BALB/cmicelydividedintothreegroups,normalcontrolgroup,100,200mg/kgAPSintraperitonealinjectiongroups.Afteroneousespleen,accountthespleicindex.CollectthemousebonemarroGM-CSFandrmIL-4.-CSFprotein
4、inserumice.ThedegreeofCD11candMHC-Ⅱexpressionin100mg/kgand200mg/kggroupsonfloetryalcontrolgroup,butthedegreeofCD80andCD86in100mg/kggroupand200mg/kggroupalcontrolgroup.ConclusionTheintraperitonealinjectionofastragaluspolysaccharidecouldstimulatetheproliferationofthep
5、reDCinbonemarroightbeenhanced,butthiseffectsice树突状细胞(DC)是目前发现体内最强的抗原提呈细胞,能激活初始T细胞,在诱导特异性免疫反应过程中起着重要作用1。肿瘤、慢性肝炎、自身免疫性疾病及移植排斥反应等疾病的发生、发展与患者免疫功能密切相关,有研究证明,这些患者体内DC发生了不同程度的数量和功能变化,因此,通过改变DC数量及成熟状态,纠正机体免疫紊乱,进而达到治疗和控制疾病的目的。黄芪多糖(astragaluspolysaccharide,APS)是中药黄芪的有效成分,具有多种
6、免疫调节作用,能恢复受抑的造血功能,改善免疫细胞活性,增强DC疫苗的抗肿瘤作用,但APS体内是否具有促进DC分化与成熟的作用目前还未见报道。1实验材料1.1动物雄性SPF级4～6周龄BALB/c小鼠,体重15～20g,中国科学院上海实验动物中心提供,清洁级条件喂养,自由进食进水。1.2药物及试剂黄芪多糖粉针剂系美国泛华医药公司产品(98)ZLb2001号,类白色无定形粉末,无臭、无味,主要成分为α21,4(1,6)葡聚糖、阿拉伯2半乳多糖、鼠李2半乳糖醛酸多糖和阿拉伯2半乳蛋白多糖,含糖量高于95%,平均分子量为2～6万。重组
7、小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)购于Peproteh公司。RPMI-1640培养基为GIBCO公司产品。胎牛血清(FCS)、红细胞裂解液均购自Sigma公司。FITC标记的抗小鼠MHC-Ⅱ(Iab)、CD11c、CD80、CD86抗体及同型对照为EROTEC公司产品。小鼠GM-CSFELISA检测试剂盒为BIOSOUSE公司产品。内毒素(LPSE.coli.0111：B4)为GIBCO公司产品。2实验方法2.1分组30只BALB/c小鼠随机分为对照组及APS100、200mg/kg组
8、,每组10只。对照组腹腔注射生理盐水200μL,其余2组分别于腹腔注射APS稀释液200μL(含APS100、200mg/kg),7d后处死。2.2计算脾指数处死小鼠,无菌分离脾脏,天平称量并计算脾指数。2.3检测血清中GM-CSF表达量摘眼获取小鼠血液静置过夜,离心吸取血清
