糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化逆转可能性的研究论文

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1、糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化逆转可能性的研究论文方开云娄晶磊肖瑛石明隽桂华珍郭兵张国忠【摘要】目的动态观察α平滑肌肌动蛋白（αSMA）和E钙黏素（Ecadherin）在糖尿病（DM）大鼠肾组织中的表达，探讨糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏纤维化逆转的可能性。方法选择SD大鼠随机分为正常对照组、DM组和胰岛素治疗组，链脲佐菌素（STZ）诱发大鼠DM。正常对照组和DM组按病程分为2、4、8、12、16、20和24RNA水平。结果DM组大鼠血糖、24h尿蛋白、Scr、RI均较正常对照组明显升高（P＜0.05,P＜0.01），胰岛素治疗组上述指标均较DM组显著降低（P＜0.05,P＜0.01）。正常大鼠

2、αSMA只在血管壁表达，DM组2RNA表达水平较正常对照组显著增多（P＜0.01），胰岛素治疗组则显著低于DM组（P＜0.01）；DM组Ecadherin蛋白的表达水平较正常对照组显著降低（P＜0.01），而胰岛素治疗组显著高于DM组（P＜0.01）。结论控制血糖可使DN大鼠肾脏一定程度的纤维化逆转，其机制可能与肾脏固有细胞表型转变被抑制或反转有关。【关键词】α平滑肌肌动蛋白；E钙黏素；糖尿病肾病；大鼠【Abstract】ObjectiveTodynamicobservetheexpressionsofαsmoothmuscleactin(aSMA)andEcadherintoi

3、nvestigatethepossibilityofrenalfibrosisreverseindiabeticnephropathyrats.MethodsStreptozotocininduceddiabeticratslydividedinto2，4，8，12，16，20，24entgroups.Thetreatmentgroupsallevelbeginningfromthe13thalcontrolgroupsatchingpointsrespectively.Bloodglucose,24hurineprotein,serumcreatinine(Scr),renalindex（

4、RI）ofratseasured.PASstainingmunohistochemicalstaining,A,Ecadherinandfibronectin(FN).Resultsparedarkablyindiabeticrats(P＜0.05,P＜0.01).Indiabeticrats,.freelesangialcellsandtubulestainingsofαSMARNAechanismmayinvolveinblockingorreversingthephenotypictransitionofrenalresidentcells.【Keya），兔抗大鼠Ecadherin

5、、FN多克隆抗体、小鼠抗大鼠αSMA和βactin单克隆抗体、羊抗兔或小鼠IgGHRP（SantaCruz）、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒、ECM试剂盒（武汉博士德）；EZSpinColumnRNAPurificationKit（BBI），RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit（Fermentas），Taq酶（TaKaRa），αSMA、FN和βactin引物合成（上海生工）。1.3实验方法1.3.1动物模型及分组大鼠随机分成正常对照组、DM组和胰岛素治疗组。正常对照组和DM组又分为2、4、8、12、16、20和24g/kg，72h后测血糖，血

6、糖≥16.7mmol/L者入选。正常对照组注射同体积的STZ溶媒。胰岛素治疗组从第13周开始皮下注射精蛋白锌胰岛素，实行个体化剂量，以血糖控制在4～7mmol/L,尿糖阴性为准分为16、20和24厚的石蜡切片，行PAS染色，光镜观察肾组织形态结构变化。以肾重（mg）与体重（g）比值作为肾脏指数（RI）。1.3.4免疫组化石蜡切片脱蜡水化，经微波热修复抗原及5%BSA封闭后，分别加入αSMA（1∶200）和FN抗体（1∶100），4℃孵育过夜。加入生物素化二抗，室温下孵育30min；滴加SABC试剂；DAB显色。PBS代替一抗，作阴性对照。双盲观察染色切片，每张切片随机取10个不重复高倍(40

7、0倍)视野,计数细胞的阳性染色，取均值表示αSMA的表达。FN的表达程度则参考郭兵等〔3〕方法计数，以10个高倍视野的阳性点数取均值。1.3.5A抗体（1∶400）和Ecadherin（1∶200）4℃孵育过夜；加相应二抗室温孵育2h，ECL试剂曝光显影。用抗体剥脱液剥脱抗体后，按同样的方法与βactin抗体（1∶300）孵育。凝胶成像系统(ChmioDox,BioRad)和Quantit