腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因联合α-ifn治疗肾癌的实验观察

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1、腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因联合α?IFN治疗肾癌的实验观察【摘要】目的:探讨腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因联合α?IFN对肾癌的治疗作用.方法:含CD基因重组腺病毒感染人肾癌细胞株786?0，用噻唑蓝(MTT)方法观察加用5?氟胞嘧啶（5?Fc）或联用α?IFN后的杀伤效应.建立786?0裸鼠皮下移植瘤模型，瘤内注射腺病毒，腹腔注射5?Fc(500mg/kg)，联合应用α?IFN时行瘤内注射，观察肿瘤生长情况.结果:在对感染腺病毒的786?0细胞的体外杀伤实验中，CD+5?Fc组的细胞存活率为(67.40±1.27)%，α?

2、IFN组的细胞存活率为(68.65±1.45)%，CD+5?Fc+α?IFN组细胞存活率为(34.67±2.38)%,(P=0.000)，两者之间有协同效应.在786?0裸鼠移植瘤模型中，CD+5?Fc联合α?IFN能够显著抑制肿瘤的生长.结论:腺病毒为载体的自杀基因CD加前体药5?Fc联合α?IFN可以明显增强抗肾癌效果.【关键词】腺病毒科；遗传载体；基因疗法；胞嘧啶脱氨酶；基因；干扰素α；腺癌，透明细胞；肾肿瘤　　【Abstract】AIM:Tostudythecytotoxicefficacyofrebinedtreatment

3、ofhumanrenalclearcarcinomaediatedcytosinediaminase(CD)geneand2?IFN.METHODS:AdenoviruscontainingsuicidegeneCDanrenalclearcarcinomacells786?0,andinvitrocytotoxicityofinfected786?0cellstreatedby5?Fcor/andα?IFNethod.Thetumorgroedicemodelbearing786?0subcutaneouslyinjectedint

4、ratumorallyg/kg)andα?IFN(105u/L).RESULTS:Therateofcellsurvivalorinnudemicemodel.CONCLUSION:Rebinantadenovirusbinedentofhumanrenalclearcarcinoma.　　【Keyinase;genes;interferon?alpha;adenocarcinoma,clearcell;kidneyneoplasms　　0引言　　肾癌的国外发病率呈上升趋势，每年死于肾癌者近万例［1］，在我国也有逐年增加趋势.早期无转

5、移性肾癌，根治性手术是首选方案，但术后仍有复发和转移的可能，大约40%～70%的患者术后会出现肿瘤远处转移［2］.晚期肾癌对放疗及化疗均不敏感,自杀基因及细胞因子治疗作为晚期肾癌的一种治疗方法，在肾癌的综合治疗中发挥了重要作用.大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（E.coli.cytosinedeaminase,CD）基因/5?氟胞嘧啶（5?Fc）治疗系统是单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpessimplexvirus?thymidinekinase,HSV?TK）基因/无环鸟苷(GCV)系统后受广泛关注的新的自杀基因，同时细胞因子在实体肿瘤治疗中也进

6、行了广泛的研究.本研究旨在探讨CD/5?Fc系统及细胞因子在肾癌治疗中的价值.　　1材料和方法　　1.1材料人肾透明细胞癌株786?0来源于中山大学生物教研室；HEK293细胞（南方医科大学泌尿外科保存）；含有含有大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（E.colicytosinedeaminase,CD）基因和绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein,GFP）基因的复制缺陷腺病毒（AdCMV?CD，orAdv）（美国洛杉矶儿童医院惠赠，南方医科大学南方医院泌尿外科保存）；5周龄、雌性BALB/C裸鼠购自广州中医药大学实验动物中心（

7、许可证SCxK<粤>2003?0001）.噻唑蓝(MTT),5?Fc,α?IFN购于Sigma公司；逆转录?聚合酶链反应(RT?PCR)kit购于大连宝生物公司；DMEM、胎牛血清为Gibco公司产品；绵羊Anti?CD多克隆抗体购于SantoCruz公司，HRP?兔抗绵羊二抗及ECL发光试剂盒购于北京中山生物技术有限公司.CD基因和腺病毒E1基因的引物合成由上海英骏生物技术有限公司合成.　　1.2方法　　1.2.1重组腺病毒扩增及滴度的测定用293细胞扩增腺病毒.将786?0按2×104接种于96孔板，每孔100μL，第

8、2d加入待检病毒悬液60μL，预稀释10倍，按2倍倍比稀释，继续培养，48h后观察细胞病变情况，并计算病毒滴度.　　1.2.2腺病毒载体CD基因PCR鉴定根据GenebankS56903CD基因DNA序列，由上海英骏生物