ssr鉴定水稻两系杂交种纯度应用及探析ⅱ.不同苗龄取样方法对室内纯度结果影响

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1、SSR鉴定水稻两系杂交种纯度应用及探析Ⅱ.不同苗龄取样方法对室内纯度结果影响摘要：以水稻（ＯｒｙｚａｓaｔｉｖａＬ．）两优１７为试验材料进行标准发芽后，对幼苗进行大苗、小苗分类，并利用ＳＳＲ引物分别对其进行室内纯度鉴定。鉴定结果表明，苗的大小对鉴定结果的影响较大，小苗与大苗的纯度相差２．８个百分点，超出了允许的误差范围。与大田相比，大苗的纯度更接近于田间秧苗纯度。在田间小苗往往不能成苗，不影响大田纯度，故小苗是造成室内与大田纯度鉴定结果产生差异的重要原因之一。关键词：水稻（ＯｒｙｚａｓaｔｉｖａＬ．）；ＳＳＲ；室内；田间；纯度鉴定中图分类号：Ｑ７８９；Ｓ５１１文献标识码：Ａ

2、文章编号：0439－８114（２０12）17－3687-02ＳｔｕｄｙｏｎＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳｅｅｄＰｕｒｉｔｙｏｆＴｗｏ－ｌｉｎｅＨｙｂｒｉｄＲｉｃｅｂｙＳｉｍｐｌｅＳｅｑｕｅｎｃｅＲｅｐｅａｔ（ＳＳＲ）Ⅱ．EffectsofSamplingMethodsonLaboratoryPurityDetectionＬＩＡＯＦａｎｇ-ｌｉ1，ＺＨＡＮＧＹｕ-ｆｅｉ1，ＬＩＮMeｉ1，ＺＨＡＯＨｏｎｇ1，ＸＩＯＮＧ5Ｘｉａｎ-ｆｅｎｇ1，ＴＵＳｈｕ-ｘｉｎ2，ＺＨＡＮＧＫａｉ3（１．ＳｅｅｄＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎＢｕｒｅａｕｏｆＪｉｎｇｚｈｏｕ，Ｊｉｎｇｚｈｏｕ４３４０２

3、０，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ；2．ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ；3．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＹａｎｇｔｚｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎｇｚｈｏｕ４３４０２５，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＳｅｅｄｌｉｎｇｓｏｆＬｉａｎｇｙｏｕ１７ｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｓｔａｎｄａｒｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｃｌａｓｓｉｆｉｅｄａｓｌａｒｇｅorｓｍａｌｌｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．ＴｈｅｌａｂｏｒａｔｏｒｙｓｅｅｄｐｕｒｉｔｙｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｙＳＳＲ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔ

4、ｈａｔｔｈｅｓｉｚｅｏｆｓｅｅｄｌｉｎｇｓｈａｄｏｂｖｉｏｕｓｅｆｆｅｃｔｏｎｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｕｒｉｔｙａｓｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｌａｒｇｅａｎｄｓｍａｌｌｓｅｅｄｌｉｎｇｗａｓ2．8％，ｗｈｉｃｈｅｘｃｅｅｄｔｈｅａｌｌｏｗａｂｌｅｅｒｒｏｒｒａｎｇｅ．Ｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆ5ｌａｒｇｅｓｅｅｄｌｉｎｇｗａｓｓｉｍｉｌａｒｗｉｔｈｔｈａｔｏｆｆｉｅｌｄ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｓｍａｌｌｓｅｅｄｌｉｎｇｓｈａｄｌｉｍｉｔｅｄｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｆｉｅｌｄａｓｔｈｅｙｃｏｕｌｄｎｏｔｍａｔｕｒｅｔｈｕｓｗａｓｔｈｅｋｅ

5、ｙｆａｃｔｏｒｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｓｅｅｄｓｐｕｒｉｔｙｉｎｌａｂｏｒａｔｏｒｙａｎｄｆｉｅｌｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｉｃｅ（ＯｒｙｚａｓaｔｉｖａＬ．）；ＳＳＲ；ｉｎｄｏｏｒ，ｆｉｅｌｄ；ｐｕｒｉｔｙｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ水稻（ＯｒｙｚａｓaｔｉｖａＬ．）的种子发芽率和成秧率是两个概念，前者表示在规定条5件和时间内长成的正常幼苗占供检种子数的百分率，后者表示百个芽苗大田形成正常植株的株数。前人用ＳＳＲ标记检测种子纯度时，用于提取ＤＮＡ的材料大多来自两个途径［１-１０］，一是在田间植株上直接剪取叶片，二是在发芽箱内培养幼苗。

6、第一种方法由于省去了种子样品发芽、成秧等环节，其结果与原样品实际纯度有所差异；第二种方法由于发芽箱条件往往设定为种子的最适发芽环境，很多在田间不能成苗的种子在室内可以长成弱苗或残苗，在取样时，根据操作规程，这类小苗都被当成鉴定对象进行了检测。这一批在大田有可能不能成秧的幼苗是否会影响到室内鉴定结果与大田生产中实际纯度的吻合性，目前尚未见报道。本试验模拟田间成秧率取样，探索ＤＮＡ模板制备前，按室内标准发芽方法获得的大苗、小苗对种子纯度鉴定结果的影响，从而寻求减少或修正利用ＳＳＲ引物鉴定室内与田间纯度之间误差的途径。１材料与方法１．１材料所用杂交水稻品种两优１７及其亲本均由湖北

7、省种子管理局统一提供。所用引物及试剂均由北京鼎国生物有限公司提供。１．２ＰＣＲ反应体系ＰＣＲ扩增反应总体积１０μＬ：１０×ｂｕｆｆｅｒ１μＬ，１０ｍmol/LｄＮＴＰ０．２μＬ，５０ｎｇ／μＬｐｒｉｍｅｒ０．２μＬ＋０．２μＬ，２U／μＬＴａｑ酶０．６μＬ，２５ｎｇ／μＬＤＮＡ１μＬ，ｄｄＨ２Ｏ６．８μＬ。ＰＣＲ扩增程序：９４℃预变性４ｍｉｎ；９４℃变性１５ｓ，５５℃退火１５ｓ，７２℃延伸３０ｓ，３５个循环；７２℃下延伸７ｍｉｎ。扩增产物在浓度为３％、含ＥＢ的琼脂糖凝胶中进行电泳后应用凝胶成像系统观察记录。１．３5