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时间:2018-07-08
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1、大鼠卵巢动情周期和排卵过程的论文【摘要】目的:观察松弛素样因子(rlf)基因在大鼠卵巢动情周期和排卵过程中的表达,探讨rlf在大鼠卵巢功能中的作用。方法:采用rtpcr方法。结果:成年大鼠整个动情周期卵巢中都有rlfmrna的表达,在动情前期、动情期卵巢表达较强,动情间期和动情后期卵巢较弱。pmsghcg处理的未成年大鼠于排卵时rlfmrna的表达降低。结论:rlf与卵泡发育、排卵、黄体形成和退化密切相关。【关键词】rlf;大鼠;动情周期;排卵作者简介:张承玉,女,讲师,硕士,从事生理学教学与生殖内
2、分泌研究工作,email:zcy6668815yahoo..松弛素样因子(relaxinlikefactor,rlf)是新近发现的insulinlikefactor3(insl3)基因的产物,属于胰岛素—胰岛素样生长因子—松弛素(insulin–igf–relaxin)家族[1]。因rlf主要表达于两性生殖腺,所以已经逐渐成为生殖生理领域研究的又一热点。目前国外对rlf的研究主要集中在雄性动物,且对啮齿动物研究较少,国内鲜有rlf的实验性报道。本实验旨在观察rlfmrna在大鼠动情周期和外源性激素诱
3、导的模型大鼠排卵过程中表达的动态变化,以探讨rlf在大鼠卵巢功能中的作用。1材料与方法1.1实验动物以及主要试剂:健康雌性sg)(天津实验动物中心产品),注射用绒促性素(hcg)(宁波市激素制品厂产品),trizolrna提取试剂(gibcolbrl产品),引物(上海捷倍思公司产品),takara逆转录试剂盒、tag酶、dntp、pcrbuffer、marker(宝生物工程有限公司产品)。1.2动情周期以及排卵:健康成年雌性sg50iu/只,促进卵泡发育,pmsg48h后,颈部皮下注射hcg25iu/只
4、,分别于hcg0h、4h、8h、12h、24h、48h取卵巢,每组取材3只,处理同前。1.3rtpcr1.3.1rna的提取以及逆转录:参照文献方法[2],应用gibcobrl公司trizolrna提取试剂,分别提取样品的总rna。通过紫外分光光度仪测定提取的rna样品在波长260nm和280nm处的吸光度(a),使二者的比值(a260/a280)保持在1.80~1.985之间,符合蛋白污染容许容量(1.8~2.0),根据a值计算出总rna浓度。用takara的逆转录试剂盒将rna逆转录为cdna;扩
5、增的引物序列:rlf:caacgacatctcctgcac/ttgacacacaccacctgag;gapdh:tccaccaccctgttgctgta/accacagtccatgccatcac。1.3.2pcr以及结果分析:总反应体系均为20ul;pcr反应的条件:rlf:94℃4min;94℃30s;59.5℃30s;72℃30s38个循环72℃5min。gapdh做内参照[3]。pcr扩增产物用含溴化乙锭(eb)的1.5%琼脂糖凝胶(1(tae)电泳检测。凝胶图像分析系统扫描各电泳带的灰度值,计算
6、rlf与gapdh的灰度值的比值,即为样品rlfmrna的表达水平。2结果2.1动情周期大鼠卵巢rlfmrna的表达rtpcr结果显示:在整个动情周期大鼠卵巢都有rlfmrna的表达,且呈周期性变化:于动情前期和动情期表达增强;动情后期和动情间期表达减弱(图1)。2.2大鼠卵巢rlfmrna的表达与排卵的关系rtpcr结果显示:hcg刺激0h、4h、8h时,大鼠卵巢rlfmrna水平逐渐增高,呈时间依从性;而hcg刺激12h时大鼠卵巢rlfmrna水平降低;hcg刺激24h、48h时,大鼠卵巢rlf
7、mrna表达又开始增强(图2)。3讨论卵巢是个复杂的内分泌器官,卵泡的发育、成熟、排卵、黄体的形成、退化,不仅受下丘脑—垂体—卵巢轴的调节,也和卵巢内一些局部调控因子的调节有关。rlf是新近发现的主要由性腺产生的调控因子,其在哺乳动物生殖中的作用越来越受到关注。在雄性,rlf主要是由睾丸leydig细胞表达,在其它组织图2用rtpcr方法检测rlfmrna在假孕大鼠卵巢中表达的相对强度如附睾,前列腺,丘脑下部也有rlf的转录。在雌性,rlf显示有更广泛的分布。卵巢是rlf的主要来源,此外在绒猴的子宫基
8、质,不同物种的胎盘,甲状腺和乳腺等组织都有rlf的表达[4]。本实验用rtpcr方法观察到在整个动情周期中大鼠卵巢均有rlfmrna的表达,且呈周期性变化。于动情前期(此期相当于人类月经周期的卵泡期,卵泡加速生长)和动情期(此期相当于排卵期,卵泡发育成熟并排卵)表达增强,动情后期(此期相当于黄体期,黄体生成并逐渐成熟)和动情间期(此期相当于月经期,黄体退化并向卵泡期转换)表达减弱,此结果显示大鼠卵巢rlf的表达可能与卵泡发育成熟,早期黄体
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