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1、绞股蓝总皂苷提取工艺研究论文.freelma.MethodAccordingtothetotalsaponinextractingrate,theextractingtechniquesizedbyorthogonaldesign.ResultsThefactorsthatextractingtimeandextractingtimeshavesignificanteffectontotalsaponinextraction,andtheamountofalcoholsolutionhasinsignificanteffectoni
2、t.ConclusionTheoptimalextractingtechniquesese.Keymatotalsaponin；extractingtechniques；orthogonaldesign绞股蓝(Gynostemma)为葫芦科绞股蓝属多年生蔓生草本植物,主要含有皂苷、黄酮、多糖,还含有人体必须的多种氨基酸、维生素和微量元素等成分。现代药理学研究表明,绞股蓝具有抑制肿瘤、抗衰老、降低血脂、增强免疫力和保护心脏的作用1。绞股蓝总皂苷片作为药品已经上市多年,.freelg置5mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成浓
3、度为2.0mg/mL的储备液。精密量取储备液50、100、150、200、250μL分别置15mL具塞试管中,挥干甲醇,分别加入新配置的5%香草醛冰醋酸溶液0.4mL、高氯酸1.6mL,摇匀,密塞,置60℃水浴中加热15min后取出,立即用冷水冷却至室温,分别精密加入冰醋酸10mL,摇匀,作为供试品溶液。另精密量取甲醇溶液250μL置15mL具塞试管中,按照上述操作,到加入冰醋酸10mL摇匀为止,作为空白溶液。取供试品溶液和空白溶液,照分光光度法《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅦA试验,在560nm的波长处分别测定吸收度。以人参皂
4、苷Rb1的量X(mg)对吸收度A进行回归,得标准曲线方程为：A=1.2757X+0.0019,r=0.9989。结果表明,当取样量在0.102～0.510mg范围内时,人参皂苷Rb1的含量与吸收度呈良好的线性关系。2.2绞股蓝总皂苷含量测定方法精密称取绞股蓝总皂苷粉末20mg置5mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取200μL置15mL具塞试管中,挥干甲醇后按“2.1”项下操作,测定吸收度,用标准曲线计算出绞股蓝总皂苷的含量。2.3绞股蓝总皂苷的提取工艺将干燥的绞股蓝药材粉碎成粗粉,准确称量100g置圆底烧瓶中,用70
5、%乙醇多次回流提取,合并提取液,用旋转蒸发器浓缩后减压干燥,干燥物用1000mL的热水充分溶解,加入同体积的石油醚萃取3次,将水层溶液用同体积的水饱和的正丁醇反复萃取,至正丁醇层无色为止,合并正丁醇提取液,用旋转蒸发器浓缩后减压干燥,即得。2.4绞股蓝总皂苷提取工艺的正交设计根据初步试验结果,选用L9(34)正交试验表,以乙醇用量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)为试验因素,每个因素取3个水平(见表1)。取样品,按照正交设计进行实验,以绞股蓝总皂苷的提取量为考察指标,进行提取工艺的优选。表1正交试验因素水平表（略）2.5绞股蓝总
6、皂苷提取工艺的稳定性试验按照正交试验选择的工艺条件,重复进行绞股蓝总皂苷的提取,并依法测定绞股蓝总皂苷的含量,评价正交试验选择的工艺条件是否稳定。3结果3.1正交试验结果按表1的因素水平设计,正交试验结果见表2,方差分析见表3。由表2中极差的直观分析法R值可以看出,因素B的极差0.56为最大,说明它是A、B、C三因素中对绞股蓝总皂苷提取影响最大的因素,其次是因素C,它的极差为0.47,这3个因素对绞股蓝总皂苷提取的影响由大到小的顺序依次为BCA。由表3的方差分析结果可以看出,在α=0.1的水平上,B因素和C因素对绞股蓝总皂苷提取有显
7、著性影响,A因素的影响不显著。结合表2和表3的分析可以得出最佳工艺条件为A1B3C3,即药材加8倍量70%的乙醇,回流提取3次,每次2h,。表2正交试验结果（略）3.2绞股蓝总皂苷提取工艺的稳定性试验结果为了验证正交试验优选的工艺条件的稳定性,称取3份100g绞股蓝药材,分别按照最佳工艺条件A1B3C3操作。合并回流提取液,用旋转蒸发器浓缩后减压干燥,干燥物用1000mL的热水充分溶解,加入同体积的石油醚萃取3次,将水层溶液用同体积水饱和的正丁醇反复萃取,至正丁醇层无色为止,合并正丁醇提取液,用旋转蒸发器减压干燥浓缩。平行操作,依法
8、测定绞股蓝总皂苷的含量,结果见表4。表3方差分析表（略）表4绞股蓝总皂苷提取工艺稳定性试验结果（略）4讨论本实验以绞股蓝总皂苷提取量为参考指标,对绞股蓝总皂苷的提取工艺进行了优选,优选的最佳工艺条件为A1B3C3。按照最佳工艺条件进行
