用基因芯片研究乙型肝炎病毒x蛋白羧基端缺失40个

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1、用基因芯片研究乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失40个【摘要】目的用基因表达谱芯片技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白全长序列和X蛋白羧基端缺失40个氨基酸序列之间差异表达的基因，初步探索HBV相关的肝细胞癌发生的分子机制。方法将20228条cDNA用点样仪点在特制的玻片上制备成表达谱芯片，将带有乙型肝炎病毒HBx蛋白全长基因序列和HBx蛋白羧基端缺失40个氨基酸（HBx3’40）基因序列的pcDNA3（）的质粒分别转染肝癌细胞系Huh7，提取两株细胞的总RNA，逆转录为cRNA，用Cys3和Cy5两种荧光分别标记，与表达谱芯片杂交，通过计算机扫描和数据处理，筛选出差异表达

2、的基因。结果差异表达的基因有167条，其中上调基因145条，下调基因22条，包括原癌及抑癌基因、细胞周期和细胞凋亡相关基因、信号转导和免疫调节相关基因、细胞增殖和代谢及基因转录等相关编码基因。结论运用cDNA表达谱芯片分析基因表达的差异,能快速筛选出HBx和HBx3’40之间差异表达的基因并高效率地对基因功能进行研究，为进一步研究HBV的致癌机制提供了理论依据。【关键词】cDNA芯片;乙型肝炎X蛋白;缺失;基因;差异表达　　IdentificationofDifferentiallyExpressedGenesinHepatitisBVirusXProteinC

3、terminallyTruncated40AminoAcidsbycDNAMicroarray　　Abstract：ObjectiveToinvestigatethedifferentiallyexpressedgenesofthefull－lengthsequenceofHBVXproteinandthesequenceoftheHBVXproteindeletionmutantcterminallytruncated40aminoacidsbycDNAmicroarrayanalysisandtoevaluatethemolecularbiological

4、mechanismsofthehepatitisBvirusmediatedhepatocarcinogenesis.MethodsTotalRNAsHuh7cellstransfectedinallytruncated40aminocidsandpcDNA3()integratedthefulllengthsequenceofHBxproteinvectors,thenRNAsicroarrayscontaining20228humancDNA.Analysesedtodeterminethedifferentpatternofgeneexpression

5、inthecellsinallytruncated40aminoacidsandthechangesintheexpressionlevelbyputer.ResultsThroughthiscDNAmicroarrayongthoseangenes,theexistinggenesincludingoncogenesandtumorsuppressiongenes,cellcycleandcellapoptosisgenes,signaltransductionandimmuneregulationgenes,cellproliferationandmetabo

6、lismgenes,andgenetranscriptionrelatedgenes.ConclusionMicroarraytechniqueiseffectiveinscreeningthedifferentiallyexpressedgenesandexploringtheirfunctionbetolecularmechanismofhepatomaassociatedicroarray;HepatitisBvirusXprotein;Deletion;Gene;Differentialexpression　　0引言　　HBx蛋白是一种广泛的反式作用因子

7、，对多种细胞与病毒的增强子及启动子有反式激活作用,参与细胞信号传导和转录调控，与肝细胞癌的形成和发展密切相关［1］，大量研究表明，HBx蛋白存在不同程度的缺失和突变，并且发现HBx蛋白变异在肿瘤组织比非肿瘤组织更为常见［2］。阐明HBx蛋白在HBV相关的肝细胞癌发生发展中的作用，对于肝细胞癌的防治具有重要意义。本研究应用含有20228条人类全长和非全长基因的cDNA表达谱芯片，对转染有HBx全长蛋白和HBx蛋白羧基端缺失40个氨基酸基因序列的二株细胞进行相关基因的筛查，寻找HBx蛋白反式激活基因及其与肝细胞癌发生的关系，为研究HBV相关的肝细胞癌的形成机制提供理论

8、依据。