胸髓横断对大鼠膀胱神经支配通路的影响―假狂犬病毒跨突触示踪研

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1、胸髓横断对大鼠膀胱神经支配通路的影响―假狂犬病毒跨突触示踪研【摘要】目的利用假狂犬病毒跨突触示踪技术，研究胸髓横断伤所致的急、慢性脊髓损伤（SCI）对膀胱脊髓神经支配通路的影响。方法76只SD大鼠随机分为4组:non-SCI、SCIa、SCIb和SCIc组。SCIa、SCIb和SCIc组大鼠完全横断脊髓，在饲养不同时间后，膀胱壁内注射假狂犬病毒（PRV）;non-SCI组大鼠不损伤脊髓，仅于膀胱壁组织内注射PRV。各组注射PRV后于既定时间点经心脏灌注固定取材。采用链霉卵白素―过氧化物酶（SP）免疫组织化学方法显示背根神经节（DRG）和脊髓切片中PR

2、V阳性神经元。计算机图像分析软件统计各组PRV阳性神经元数目和面积，单因素方差分析比较各组统计值差异。结果non-SCI、SCIa、SCIb和SCIc组大鼠膀胱重量分别为（144±9）mg、（142±8）mg、（486±51）mg和（656±69）mg。non-SCI和SCI大鼠PRV示踪的时限性和分布相似。SCI大鼠病毒标记的DRG细胞面积显著增加（P<0.001），non-SCI、SCIa、SCIb和SCIc组分别为（593±40）μm2、（588±39）μm2、（815±53）μm2和（902±57）μm2。慢性SCI大鼠在注射PRV后第

3、3天，L6和S1节段后角标记细胞数显著增加;注射后第4天，L6和S1节段标记的运动神经元数也显著增加。结论急性和慢性脊髓损伤不影响大鼠膀胱的PRV示踪特性。慢性SCI大鼠膀胱排尿反射通路出现显著重组。　　关键词脊髓损伤膀胱排尿反射通路假狂犬病毒跨突触示踪　　Effectofthoraciccordtransectionontheurinarybladderspinalneuralpathinatetheeffectofacuteandchronicspinalcordinjury（SCl）resultedfromthoraciccordtransec

4、tionontheurinarybladderspinalneuralpathlydividedinto4groups，non-SCI，SCIa，SCIbandSCIcrespectively.Thenon-SCIratsundereafterSCI.Transcardiacperfusionfixationmuno-histochemicalprocedure.AllsectionseasuredpusCue-2imageanalˉysissystem.Oneeasurementsbetalandspinalizedrats.ResultsTheb

5、ladderg，（142±8）mg，（486±51）mgand（656±69）mgrespectively.Thetime-orderedfloilarinthenon-SCIratsandintheSCIrats.Thecross-sectionalareaofthelabeledDRGcellprofilesincreasedsignificantlyafterSCI（P<0.001），2，（588±39）μm2，（815±53）μm2and（902±57）μm2innon-SCI，SCIa，SCIbandSCIcratsrespectiv

6、ely.ThenumberoflabelledcellsindorsalhorninL6andSlsegments3daysafterPRVinjectionmarkedlyincreasedinchronicSCIratsandsodidthenumberoflabeledmotorneurons4dayspost-inˉjection.ConclusionTheacuteandchronicSCIhasnoeffectontheprocessofvirustranssynaptictransportbeloarkedreorganizationo

7、fthemicturitionreflexpathicturitionreflexpathg/kg和5mg/kg）行胸髓横断。切除T8～T10椎板，显微剪刀完全横断脊髓，脊髓断端间隙间填塞明胶海绵，关闭伤口。脊髓动物置于特殊笼中（抬头即可进食水）。每天腹部膀胱区挤压2～3次辅助排尿，直至膀胱反射建立。随后每天挤压1次排净残余尿。　　相同方法麻醉，下腹正中切口显露膀胱，膀胱腹面左右两侧壁内分别使用10μlHamilton显微注射器注射PRV液2.0μL（PRV，Bartha’sK株，108/ml，由中国兽药监察所蒋玉文教授提供），注射后针头在膀胱壁内停

8、留60s，拔出后压迫60s，逐层关闭伤口。注射病毒后，动物单独饲养，每天观察。所有动物无任何发病迹象。　　1