夹竹桃叶提取液的抑菌作用研究论文

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1、夹竹桃叶提取液的抑菌作用研究论文李爱民，刘再明，李胜华【摘要】目的研究夹竹桃叶提取液的抑菌作用。方法采用不同提取方法制备夹竹桃叶提取液，用二倍稀释法确定最低抑菌浓度。结果夹竹桃叶不同提取液对6种供试菌种的生长均有不同程度的抑制作用，其中醇提液的抑菌效果好于水提液和醚提液，且以70%乙醇提取液的抑菌作用效果最佳。结论夹竹桃叶的醇提液具有很好的抑菌效果。【关键词】夹竹桃；叶提取物；抑菌作用Abstract：ObjectiveTostudytheantibacterialactivityofleafcrudeextractsofNeriumindicumMi

2、ll.MethodsTheleafcrudeextractspreparationployedbyetherextraction,respectively.Theminimalinhibitoryconcentrationinedbythedoubledilutionmethod.ResultsTheleafcrudeextractshadantibacterialactivitytosixbacteria(Escherichiacoli,Proteusvulgaris,Pseudomonasaeruginosa,Staphylococcusaureu

3、s,Enterococcusfaecalis,Sarcinalutea)insomeextent.Theleafcrudeextractslbtaineelby70%alcoholhadthebestantibacterialactivityinaboveextractmethods.ConclusionTheleafcrudeextractsobtainedbyalcoholhaveagoodantibacterialactivity.KeyindicumMill.；Leafcrudeextracts;Antibacterialactivity夹竹桃

4、NeriumindicumMill.属于夹竹桃科，是一种四季常绿直立灌木，叶像竹叶.freelindicumMill.，为怀化学院校园内栽培植株。1.2供试菌种大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)、普通变形杆菌(Proteusvulgaris)、铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、粪肠球菌（Enterococcusfaecalis）、八叠球菌（Sarcinalutea），均由怀化学院微生物学实验室提供。1.3培养基LB(Luria-Bertani)液体培养基和

5、LB固体培养基。2方法2.1水提取液的制备水提液采用煎煮法。取夹竹桃叶，于60℃恒温干燥16～18h后，用蒸馏水煎煮两次，30min/次。合并滤液，于4000r/min离心10min，取滤液浓缩至含生药1g·ml-1。灭菌后放入冰箱中保存备用。2.2醇提液和醚提液的制备取夹竹桃叶，分别溶于50%，70%，95%的乙醇和石油醚中，浸提2h后，然后置于超声波设备中超声波提取45min，于4000r/min离心10min，取滤液浓缩至含生药1g·ml-1。灭菌后放入冰箱中保存备用。2.3菌液的制备将所有供试菌活化两代后，分别接入试管斜面培养基上，各菌株接多支

6、斜面，在37℃恒温培养18～24h。每次实验每种菌取1支斜面供试，其余于4℃冰箱保存备用。实验时分别取6种供试菌种的斜面培养物适量，接种于LB液体培养基内，于37℃，160r/min下培养16～18h，然后稀释至10-4备用(约为106cfu/ml)。2.4抑菌实验在无菌条件下，将灭菌试管分成两大组，每组42支。42支试管再分成6小组，每组7支。第1支试管中加入1ml2倍浓度的LB液体培养基，第2～5支试管中各加入1mlLB液体培养基，向第1支试管中加入1ml提取液后按2倍稀释法，使各管药液浓度分别为0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03

7、125g/ml，然后向各管中加入0.1ml的10-4菌液，第6支试管中加2mlLB液体培养基，不加提取液作为阳性对照，第7支试管中加提取液但不加菌液作为阴性对照，将培养物置于37℃培养16～18h。从以上培养物中分别取0.1ml涂布于固体LB培养基平板上，于37℃培养16～18h后观察。以上实验重复3次。2.5最低抑菌浓度(MIC)的测定采用2倍稀释法，将各提取液稀释成不同浓度的系列，加入0.1ml的10-4菌液，同时设置不加提取液的作为对照，于37℃恒温培养箱中培养16～18h后，从中取出0.1ml涂布于固体LB培养基平板上，于37℃培养16～18h

8、后观察。以上实验重复3次。以完全无菌生长的平板所对应的提取液浓度作为最低抑菌浓度(MIC)。3