黄花蒿离体再生体系优化研究

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1、黄花蒿离体再生体系优化研究摘要：为优化黄花蒿（ArtemisiaannuaLinn）离体再生体系，并建立黄花蒿遗传转化途径，选用黄花蒿常规品种428-A为材料，以子叶、幼嫩叶片、顶芽作为外植体，设计不同植物生长调节剂组合的培养基配方。结果表明，黄花蒿子叶适宜作为组织培养的外植体，MS+1.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA培养基有利于诱导愈伤组织形成和分化，其出愈率及出芽率分别高达89.0%、85.7%，1/2MS+0.05mg/LNAA+0.05mg/LIAA培养基有利于再生植株不定根的诱导，

2、生根诱导率达94.0%。中国8/vie　　关键词：黄花蒿（ArtemisiaannuaLinn）；外植体；子叶；植株再生体　　中图分类号：Q78文献标识码：A：0439-8114（2017）06-1161-04　　DOI：10.14088/j.ki.issn0439-8114.2017.06.042　　Abstract：InordertooptimizeArtemisiaannuaLinninvitroregenerationsystemandestablishtransformationisiaann

3、uaLinnasmaterialpleandeffectiveregenerationsystemofArtemisiaannuaLinnula.Theresultsindicatedthattheyoungleavesisthebestmaterialforthetissuecultureofexplant.ThebestsolidmediumofcallusformationanddifferentiationisMS+1.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA，therateofcallusf

4、ormationis89.0%andtherateofbuddingis85.7%.Themostusefulsolidmediumofinducingofrootis1/2MS+0.05mg/LNAA+0.05mg/LIAA，inisiaannuaLinn；explants；youngleaves；vitro　　黄花蒿（ArtemisiaannuaLinn）为一年生艾属菊科草本植物，在中国已经有两千多年的药用历史[1]。从黄花蒿中分离出的活性单体成分青蒿素（Artemisinin），被证明是一种高效、

5、低毒、副作用小的新型抗疟活性成分，已广泛应用于临床[2]。同时青蒿素及其衍生物在抗肿瘤、抗心血管疾病、镇痛、免疫、抗血吸虫、抗病原虫等方面也具有显著疗效[3]。　　黄花蒿在世界范围内分布广泛，产地环境条件差异大，青蒿素含量变化也十分明显[4]。在中国，青蒿中青蒿素的含量从南到北基本呈递减趋势，其提取成本高，导致青蒿素价格居高不下，难以满足市场需要[5]。近年来，人们尝试从组织培养及扩繁技术获得的黄花蒿中分离青蒿素，单位产量黄花蒿中分离的青蒿素含量高于野生�S花蒿[6]。通过植物组织培养技术进行离体快繁，

6、不仅可为生产上提供大量黄花蒿试管苗，推动优质黄花蒿生产的发展，而且可使其成为提高青蒿素产量的重要途径[7]。　　近年来，在黄花蒿的组织培养方面，目前已通过其叶片、茎尖、茎段、花序等多种外植体诱导愈伤及再生植株，但不同生长调节剂种类和组合，在不同基因型黄花蒿品种上应用差别较大，结果不尽一致[8]，其组培过程中的玻璃化现象也较严重[9]。本试验分别以子叶、叶片、顶芽作为外植体，在不同组织培养阶段添加不同种类和不同浓度的植物生长调节剂以优化培养基配方，建立简单有效的再生体系，为黄花蒿的遗传转化和优良种质的保存

7、及改良提供依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　黄花蒿种子为常规品种428-A，湖南农业大学生物科学技术学院朱卫平副教授惠赠。　　1.2培养基　　1）基本培养基：MS+3%蔗糖+7%琼脂，pH5.8。　　2）愈伤组织诱导及分化培养基：以MS为基本培养基，设置NAA、6-BA、KT3种植物生长调节剂的不同浓度组合，进行愈伤的诱导、增殖及不定芽分化培养。　　3）不定芽生根培养基：以1/2MS培养基为基础，设置NAA、IAA的不同浓度组合诱导生根。　　1.3外植体的获得　　1）将脱脂棉浸透MS液体培养基与培

8、养皿一起经高压蒸汽灭菌备用。将黄花蒿种子放入离心管中，加入1mL0.1%HgCl2溶液，快速混匀、悬浮，6000r/min离心2min，无菌条件下吸出升汞，再用无菌水清洗5～6次，然后将种子均匀铺到放有脱脂棉的无菌培养皿中，置于28℃恒温培养箱培养，使其发芽获得无菌苗。在黄花蒿幼苗生长的不同时间取发育良好的子叶、叶片和顶芽分别作为外植体接种到不同浓度配比的植物生长调节剂培养基上。　　2）直接将种子播种在腐殖土∶蛭石（3∶1）的营养土上，3～