邪毒壅盛证h22荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征研究

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1、邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征研究卓少元方肇勤卢文丽潘志强梁超吴中华刘小美侯俐张辉廖明娟高必峰【摘要】　　目的揭示H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证肿瘤组织基因表达的特征。方法采用GeneChipMouseExon1.0STArray等技术及芯片分析方法，观察H22荷瘤小鼠邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果筛选到邪毒壅盛证独特性高表达的基因32个，其中包括Tcte3、Phf7、Ldhc等参与睾丸发育、精子或卵子发生的基因22个，Adipoq、Nrcam、Tnfaip6等与肿瘤有关的基因4个，以及Atp8b3、Pnpla3、Re

2、tn等其他功能的基因6个。筛选到邪毒壅盛证独特性低表达的基因2个，有Cort和LOC668417。结论邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因，可能是该证候与其他证候区别的内在特征。【关键词】肿瘤；证候；同病异证；邪毒壅盛证；基因芯片；小鼠　　Abstract：ObjectiveToinvestigategenesexpressionprofileintumortissuesofH22micees.MethodsGenesexpressioninthetumortissuesofH22miceesofobstructionofevilsyndromes,“

3、Qi”deficiency,deficiencyof“QiandYang”,ordeficiencyof“QiYinandYang”,etrixGeneChipMouseExon1.0STArray.Results32specialhigher-expressiongenesatogenesisoroogenesis,4genesrelatedtotumors,and6othergene.Simultaneously,2specialloerousgeneshavespecialexpressioninthetumortissueofH22micees,aybeintrin

4、sicdifferencebeteand3othersyndromes.　　Keyor;Syndrome;DifferentSyndromeforthesamedisease;ObstructionofEvilSyndromes;Genechip;Mice　　“同病异证”和“同病异治”是中医理论的特色之一，其内在物质基础是什么，是长期以来被关注和研究的课题。本项目组以往的研究建立起H22荷瘤小鼠常见证候的标准化检测与辨证〔1～4〕，发现随着肿瘤的发展，荷瘤小鼠会自发形成证候并发生演变，早期以邪毒壅盛证和气虚证为主，以后发展为阳气虚证和气阴阳虚证，与人类十分相似〔5，6〕。为

5、揭示“同病异证”物质基础，我们采用Affymetrix的GeneChipMouseExon1.0STArray技术，对H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证、气虚证、阳气虚证和气阴阳虚证4个常见证候的肿瘤、下丘脑、垂体、肾上腺等组织基因的表达进行了检测。本文重点探讨邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因表达的特征。现报道如下。　　1材料与方法　　1.1芯片检测数据的获取采用项目组最近研究获得的4种常见证候荷瘤小鼠肿瘤组织的外显子芯片数据：昆明种小鼠〔购自上海中医药大学动物实验中心，雄性，体重24g～26g，合格证号SCXK（沪）2003-0003，清洁级〕，腋下接种H22肿瘤腹水癌细胞后，

6、采用小鼠计量化四诊和辨证方法〔1〕，筛选出最典型的早期（接种后8d）邪毒壅盛证和气虚证，中期（接种后21d）阳气虚证和中晚期（接种后29d）气阴阳虚证荷瘤小鼠各16只，并分别提取4个不同证候小鼠肿瘤组织RNA，将各证候16个样本合并，采用AffymetrixGeneChipMouseExon1.0STArray及其方法进行检测。外显子芯片的检测结果有两种输出方式：外显子和核心基因。本文取16661个核心基因进行初步分析〔7〕。　　1.2芯片数据的处理　　1.2.1相关基因的筛选条件四张芯片中读数至少有一组芯片统计读数（以下简称读数）大于270的基因（该芯片读数均数，以排除那

7、些表达过低者）；邪毒壅盛芯片读数与单纯气虚、阳气虚、气阴阳虚等3组比值，大于2.0或小于0.5的基因（视为上、下调的基因）。　　1.2.2相关基因信息的挖掘利用互联网上最具代表性、权威性的生物医学文献数据库NCBI和清华同方全文数据库（KI）等，对符合筛选条件的相关基因进行文献信息挖掘和分析。　　2结果　　在芯片的16661个基因中，至少有一组读数大于270的基因有6342个。其中，邪毒组与气虚、阳虚、阴虚3组相比，比值均大于2.0的基因有Tcte3、Vmd2、Mael、Atp8b3、Tuba3和Gstm5等32个