同时产ctxm22及tem1型β内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析论文

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1、同时产CTXM22及TEM1型β内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析论文【摘要】目的了解临床分离阴沟肠杆菌株EC003产β内酰胺酶的耐药特征和基因型。方法采用琼脂二倍稀释法对阴沟肠杆菌EC003进行MIC检测，酶提取物三维实验检测AmpC酶，双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β内酰胺酶(ESBLs)，等电聚焦(IEF)电泳测定其等电点。以耐药质粒为模板进行PCR扩增，将β内酰胺酶全编码基因克隆、表达，并对其扩增产物进行DNA序列测定和同源性分析。结果阴沟肠杆菌株EC003对所试多数β内酰胺类抗生素耐药，表型检测AmpC酶为阴性，ESBLs阳性.freelβlactam

2、ases(ESBLs)producedbyE.cloacaeclinicalisolateEC003.MethodsE.cloacaeEC003anddetectedbythreedimensionalextracttestforAmpCβlactamasesandconfirmatorytestforESBLs;antimicrobialsusceptibilityinedasesinedbyisoelectricfocusing(IEF);plasmideDNAplification;thePCRproductsicrobialsusceptibilityofthecl

3、onestrainsasesidEC003,tentsidastemplate.Thenucleotidesanddeducedproteinsequencesases.TheclonestrainproducingTEM1picillinandpiperacillinonly,ostofβlactamsandmuchmoreactivetohydrolysiscefotaximethantoceftazidine.ConclusionsThecauseoftheE.cloacaeEC003todevelopresistancetomostofβlactamsmightb

4、eduetothesimultaneousproductionofCTXM22andTEM1typeβlactamases.收稿日期：20060630阴沟肠杆菌是引起呼吸道和泌尿生殖道感染的常见病原菌，产生AmpC酶是其对β内酰胺类抗生素耐药的重要机制。但近年来研究报道证实了产生超广谱β内酰胺酶(ESBLs)是造成阴沟肠杆菌对第三代头孢菌素耐药的另一重要原因，特别是产生多种β内酰胺酶所致的耐药问题越来越受到人们的关注［1，2］。我们在研究川北医学院附属医院临床分离产ESBLs菌株的基因型时，发现阴沟肠杆菌EC003同时含有两种β内酰胺酶，并分属其两大家族。现

5、将研究结果报道如下。1材料和方法1.1材料1.1.1菌株来源阴沟肠杆菌株EC003系川北医学院附属医院检验科分离，经法国BioMerieux公司API20E系列鉴定菌种。E.coliJM109［F′traD36proA+proB+lacIqlacZ△M15/recA1endA1gyrA96(Nalr)thihsdR17supE44relA1△(lacproAB)mcrA］由四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室惠赠，标准质控大肠埃希菌ATCC25922，标准质控肺炎克雷伯菌700603(产ESBL)由四川抗菌素工业研究所惠赠，TEM1(pI5.4)和SHV1(p

6、I7.6)标准产酶菌由加拿大Queen′s大学医学院惠赠。1.1.2主要试剂头孢噻吩(cephalothin，CET)为吉林辉南长龙药业生产；氨苄西林(ampicillin，ABPC)和哌拉西林(piperacillin，PIPC)购自Roche公司；舒巴坦(sulbactam，SB)为吉林辉南长龙药业生产；头孢哌酮(cefoperazone，CPZ)、头孢噻肟(cefotaxime，CTX)、头孢唑林(cefazolin，CEZ)、头孢呋辛(cefuroxime，CXM)、和头孢他啶(ceftazidime，CAZ)由哈药集团制药总厂生产。三唑巴坦(tazobactam，TB

7、)为哈尔滨誉衡药业产品；亚胺培南(imipenem，IMP)购自MerckSharpDohme(上海)公司；头孢吡肟(cefepime，CPE)和氨曲南(aztreonam，AZ)为BristolMyersSquibb(上海)公司产品；头孢他啶纸片、头孢噻肟纸片、头孢他啶/克拉维酸纸片、头孢噻肟/克拉维酸纸片、头孢西丁纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司；pI标准(pI4.45～9.6)和Biolyte(pH3～10)购自BioRAD公司；丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺为Promega公司产品