基于1h nmr 代谢组学的阳明经穴特异性研究论文

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1、基于1HNMR代谢组学的阳明经穴特异性研究论文吴巧凤，徐世珍，余曙光，颜贤忠，唐勇，刘娟，毛森，周思远.freelagicresonance，1HNMR)和模式识别技术的代谢组学方法分别观察针刺阳明经穴与他经穴位对健康男性尿液代谢产物的影响，从针刺对机体代谢流影响的角度探讨阳明经穴的特异性。方法60例健康青年男性随机分为足三里组，梁门组，巨髎组，阳陵泉组，委中组和空白对照组，每组10例。分别针刺相应穴位，连续针刺5d，获取受试者晨尿，采用1HNMR检测尿液代谢物，运用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析等模式识别方法分析所得数据。结果针刺阳明经穴对机体尿液代谢物的影响基本一致，均可以升高尿

2、液中马尿酸和氧化三甲胺的含量，降低甘氨酸含量;针刺阳明经穴与针刺阳陵泉对尿液代谢物的影响差别不大，但与针刺委中后的差别明显;针刺委中后尿液代谢物中肌酐明显升高。结论对尿液代谢物的模式识别分析显示，阳明经穴具有一定的共性，但与阳陵泉的差别不明显，与委中的差别较为明显，有关原因尚需进一步深入研究。【关键词】针灸;经穴特异性;阳明经;代谢组学经穴特异性理论是阐明经穴功能和指导针灸临床治疗的重要基础，也是发展经络理论、评价针灸疗效的重大选题1，2。本研究从整体代谢流的角度，采用目前系统生物学中以观察复杂系统终端产物为代表的代谢组学检测技术和数据分析方法，对针刺阳明经和他经穴位后机体尿液代谢物进行

3、分析，从针刺对机体代谢流影响的角度探讨阳明经的特异性，为经穴特异性研究提供新的生物信息学依据，为代谢组学相关技术和数据分析方法在经穴特异性这一新领域的应用提供借鉴。1研究对象受试者均为男性健康志愿者，汉族，年龄20～25岁，体质量指数18～24。经检查受试者无糖尿病、柯兴氏综合征、甲状腺功能低下、性腺功能低下等代谢功能异常，无心脑血管疾病，无肝、肾功能不全或重要器官功能障碍，无精神疾患，无吸烟、嗜酒等不良嗜好。共收集60例受试者，随机分为6个组，分别为足三里组，梁门组，巨髎组，阳陵泉组，委中组，和空白对照组，每组10例。2方法2.1穴位治疗试验前所有受试者接受标准化饮食1周，忌辛辣刺激饮

4、食，避免剧烈运动。受试者每日固定时间接受针刺治疗，分别针刺相应的穴位并得气后，在相应穴位附近旁开0.5cm处再浅刺一针，不得气，作为辅助电极，连接G6805II电针仪，采用疏密波，频率为16次/min，电压220V，逐渐加大电流至能耐受为度(有明显的震颤感，但又不过分强烈)。1次/d，30min/次，连续针刺5d。空白对照组不给予任何针刺刺激。针刺全部结束后第2天收集受试者晨尿，10000r/min离心10min，获取尿液上清样本。2.21HNMR数据采集和分析取350μl的尿液，分别加入30μl的TSP/D2O(1mg/ml)，350μl磷酸缓冲溶液，充分振荡混匀后，13000r/mi

5、n离心10min。取600μl上清加入5mm核磁共振管中混匀，待用。样本分别进行1H-NMR实验。采用有预饱和的1DNOESY脉冲序列，取如下参数：谱宽8000Hz，混合时间0.15s，驰豫延迟时间2s，采样点数32k，累加次数64次;在驰豫延迟和混合期间采用预饱和方式抑制水峰，谱仪偏置设置在水峰的位置。FID信号经过填零为64k点之后，再加上0.5Hz的线增宽因子，经傅立叶变换转换为NMR图谱。以TSP为化学位移参考峰的位置，并定为δ0。对所得NMR数据经傅立叶变换得到谱图，经相位校正和基线校正之后，对一定区间内的谱图按每段0.04ppm的宽度进行分段积分，同时排除包含溶剂峰和尿素峰的

6、部分(δ4.6～6.2)。其中NOESY数据积分范围为δ0.4～9.4。将积分按每张谱的总积分强度归一化。所得数据输出并转换到Excel文件保存。2.3模式识别分析将保存的Excel格式数据输入到SIMCA-P+软件(v10.04，Umetrics，Ume，SInducedX-RayeMission，PIXE)、激光多普勒、红外辐射检测等多种现代技术相结合的方法对经穴特异性进行了评价和研究，在经穴形态结构3、生物物理特性4、经穴效应特异性5～7、经穴(经脉)一脏腑相关理论等方面作了大量的临床与基础研究，取得了一系列的研究成果。我们认为，经穴特异性是一种相对特异性，具有生物物理特异性，时

7、间动态特异性，空间特异性，脏腑相关特异性等多种表现形式，但最终的体现和结局应该是经穴效应的特异性8,9。另一方面，机体作为一个复杂的整体系统，外界刺激的扰动会干扰内源性生化物质的浓度、比例、结合或流量。针灸刺激对机体的作用具有良性、整体和综合调整的特点，是能量、物质和信息流动的综合体现，针灸刺激影响整个机体的有效功能很可能通过代谢物反映出来，通过对代谢物的检测和分析，采用数学、物理学、信息学等多种研究方法，深入挖掘所得数据的规律性，