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1、花椒抗宫颈癌Caski细胞作用及其机制的初步研究论文袁太宁，肖长义，汪鋆植【摘要】目的研究花椒挥发油抗宫颈癌Caski细胞作用及其可能的机制。方法花椒挥发油按不同时间（24,48,72h）及不同浓度(0.5～8mg/ml)分别处理Caski细胞，MTS法分析细胞的增殖速度，用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期。结果4mg/ml花椒挥发油处理Caski细胞72h可显著地抑制Caski细胞增殖，1mg/ml花椒挥发油处理Caski细胞72h即可导致亚凋亡峰的出现，且G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少。结论花椒挥发油可抑制Caski细胞增殖并诱导细胞凋亡。【关键词
2、】花椒Caski细胞细胞凋亡花椒不仅是深受民众喜爱的重要食用性香料，还是常用的中药材.freelbungeanum。Caski细胞由三峡大学分子生物学研究所提供；MTS细胞增殖分析试剂由Promega公司提供；其他化学试剂来自Sigma公司和华美公司；EPLCSXL流式细胞分析仪为BecmanCoulter公司产品；全波长酶标仪为为Thermo公司产品；R206D旋转蒸发器为上海申生科技有限公司产品；超声破碎仪为北京君合华科技发展有限公司产品。2方法2.1花椒挥发油制备使用旋转蒸发器提取花椒挥发油并过滤除菌，称取适量挥发油加入5%Tin，用RMPI1640无血清培养基
3、倍比稀释成8，4，2，1，0.5mg/ml的浓度。2.2Caski细胞培养Caski细胞接种于含10%小牛血清的RMPI1640培养液,青霉素100μg/ml,链霉素100μg/ml。置于37℃，5%CO2培养箱中常规培养。2.3细胞增殖分析将对数生长期的Caski细胞以4×107/L；细胞数接种于圆底96孔培养板,每孔50μl。37℃培养24h后,向孔内直接加入含不同浓度花椒挥发油的RPMI1640培养基50μl。在加入药物后选定的时间点(24，48，72h),向每孔中加入20μlMTS试剂,37℃继续保温2h显色,于490nm波长下读取OD值。细胞生存率（%）=O
4、D药物/OD对照×100%；细胞生长抑制率（%）=(100-细胞生存率)×100%2.4流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期取1×106对照细胞或经花椒挥发油处理的细胞,.freelCitrate,0.1%TritonX100,100mg/LRNase,50mg/LPropidiumIodode),4℃保温30min后,经流式细胞仪分析凋亡细胞及细胞周期时相分布，计算细胞增殖指数（PI）。PI（%）=（S+G2/M）/(G1+S+G2/M)×100%2.5统计学处理数据用±s表示，采用组间t检验进行统计分析。3结果3.1花椒挥发油抑制Caski细胞的增殖花椒挥发油对Cas
5、ki细胞增殖呈明显抑制作用，且这种抑制随药物浓度加大和药物作用时间延长而增加（见图1）。花椒挥发油浓度为4mg/ml时，24h抑制率为20%,48h抑制率为46%,72h抑制率为78%。3.2花椒挥发油诱导Caski细胞的程序性凋亡因发生凋亡的细胞核内,部分DNA发生片段化降解而丢失,经PropidiumIodode染色后,这部分细胞核将出现在G1峰之前,即亚凋亡峰的位置。1mg/ml花椒挥发油处理Caski细胞72h即可导致亚凋亡峰的出现。所以花椒挥发油可诱导Caski细胞的程序性凋亡。3.3花椒挥发油抑制Caski细胞周期的正常转换1mg/ml花椒挥发油作用72h
6、后G0/G1期细胞增多，S期和G2/M期细胞减少，作用具有明显的剂量依赖性（见图2），显示花椒挥发油可有效抑制细胞周期的正常转换,使细胞在G1期堆积，细胞阻滞于G2/M期，从而阻止细胞的有丝分裂,使细胞增殖受到抑制。图1花椒对宫颈癌Caski细胞生长的影响（略）图2花椒作用72h对宫颈癌Caski细胞周期的影响（略）4讨论前人研究表明传统中药可通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤血管生成、逆转肿瘤细胞多药耐药和增强机体免疫力等多种机制发挥抗肿瘤作用［5～8］。本研究分析了花椒挥发油对宫颈癌Caski细胞的影响，我们发现，花椒挥发油可有效抑
7、制Caski细胞周期的正常转换，从而阻止细胞的有丝分裂,抑制细胞生长，这种抑制随药物浓度加大和药物作用时间延长而增加；而且花椒挥发油可激发程序性细胞凋亡。因此，花椒至少可以通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等方式发挥抗肿瘤作用。而进一步的体内实验，以及明确花椒挥发油中何种成分发挥作用，其详细的抗肿瘤机制等问题尚待深入研究。【
