洛铂对人宫颈癌caski细胞生长影响的机制研究

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1、《中国图书资料分类法》分类号：R737.33单位代码：10660学号：S100097贵阳医学院2013届硕士学位论文洛铂对人宫颈癌CaSki细胞生长影响的机制研究研究生：李小琴导师：陶建蜀副教授方文副教授年级：2010级专业：临床检验诊断学2013年05月28日目录摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„17讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„25参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„31英文摘要„„„„„„„„

2、„„„„„„„„„„„„35致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„37略缩词表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„38论文原创性声明„„„„„„„„„„„„„„„„„39附：综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„40贵阳医学院2013届硕士研究生论文洛铂对人宫颈癌CaSki细胞生长影响的机制研究专业：临床检验诊断学研究生：李小琴导师：陶建蜀副教授方文副教授摘要目的探讨洛铂对宫颈癌CaSki细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响以及洛铂作用宫颈癌细胞前后蛋白质组的变化。方法1.体外培养CaSki细胞，取对数生长期的宫颈癌CaSki细胞，分为阴性对照组和实验组(加入不同浓度洛铂

3、:2、4、6、8、12、16、24和32μg/ml)，作用24、48、72小时，进行MTT实验。2.取对数生长期的宫颈癌CaSki细胞，分为阴性对照组和实验组（加入不同浓度洛铂:2、6和12μg/ml），作用24、48、72小时，倒置显微镜观察细胞的形态学改变，流式细胞技术检测洛铂对宫颈癌细胞的细胞周期阻滞、细胞凋亡诱导作用。3.6g/ml洛铂作用细胞48h，分别收集洛铂处理组与对照组细胞，提取细胞总蛋白并运用双向凝胶电泳技术分离蛋白质，PDOuest软件分析洛铂处理前后差异表达的蛋白质，选取明显表达差异在两倍以上的11个蛋白质斑点，运用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术

4、分析鉴定蛋白质样品。结果1.洛铂能够抑制宫颈癌CaSki细胞的增殖，呈浓度和时间依赖。2.洛铂能够诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡，呈浓度和时间依赖；倒置显微镜下可见明显的凋亡形态学改变，流式细胞检测示洛铂低浓度短时间作用使细胞周期阻滞在S期，高浓度长时间作用使细胞周期阻滞在G0/G1期。3.经双向凝胶电泳和液相色谱-串联质谱分析后，成功鉴定了11个蛋白质，包括泛素羧基末端水解酶16、不均一核糖核蛋白A2/B1、多聚嘧啶结合蛋白、核糖磷酸焦磷酸激酶等。结论洛铂能显著抑制宫颈癌CaSki细胞增殖，诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞。并引起细胞蛋白质组的改变，部分差异表达蛋白可能与洛铂的抗肿瘤作用

5、有1贵阳医学院2013届硕士研究生论文关。【关键词】洛铂；宫颈癌；CaSki细胞株；细胞周期；细胞凋亡；蛋白质组2贵阳医学院2013届硕士研究生论文前言宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，我国宫颈癌的发病率高居世界第2位。[1]统计表明，我国每年新增宫颈癌患者13万人左右。化学药物治疗在宫颈癌的综合治疗中占有越来越重要的地位，美国NCCN指南[2]推荐铂类药物为化疗基础药物；目前治疗宫颈癌最有效的化疗药物是铂类药物，[3]不论是单独用药还是联合用药，铂类药物都显示出良好的治疗效果，如第一代铂类药物顺铂(DDP)和第二代铂类药物卡铂。顺铂具有抗癌谱广、作用强的优点，但易造成肾脏毒性，卡

6、铂与顺铂的作用机制相似,但骨髓毒性较顺铂为重。洛铂（Lobaplatin，LBP）作为第三代铂类抗肿瘤化合物，由于疗效好、毒性小而成为目前备受关注的药物之一。临床前研究显示,LBP的抗癌治疗指数高于顺铂和卡[4]铂,而且对部分顺铂和卡铂耐药的肿瘤有效。洛铂的抗肿瘤机制，目前认为其形成DNA的链内和/或链间交联,从而影响DNA[5]的正常功能,以此达到抑制肿瘤的目的。既往在蛋白质水平上对铂类药物抗肿瘤作用机制的研究多采用免疫组化、免疫印迹和流式细胞仪间接免疫荧光技术，这些方法局限于研究一种或几种蛋白质的表达，研究结果的信息量也十分有限。蛋白质组学研究作为后基因组研究的重要组成部分，以

7、新的高度，从整体上定性和定量检测肿瘤组织细胞内蛋白质水平的变化，对进一步深化对肿瘤发病机理的认识、肿瘤标记物的筛选、肿瘤早期诊断以及抗肿瘤药物的研发都具有积极的意义。目前国内外采用蛋白质组学方法研究铂类药物对人宫颈癌细胞作用机制的文献还比较少，Yim等通过蛋白质组学技术分析经顺铂干预前后宫颈癌HeLa细胞系蛋白质组的变化,鉴定出与顺铂治疗机制密切相关的21种蛋白质，经研究发现,顺铂对宫颈癌HeLa细胞的治疗作用是通过膜死亡受体与线粒体介导的双重凋亡[6]途径实现的。迄